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目的：
1.研究益气活血经典“药对”黄芪丹参的主要组分黄芪甲苷及丹参酮IIA对microRNA-223-5p（miR-223-5p）在退变腰椎间盘表达及髓核细胞功能的影响。
2.临床中观察黄芪丹参“药对”联合单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。
方法：
1.实验研究
（1）根据椎间盘退变磁共振Pfirrmann分级，术中收集退变程度为Ⅲ级和Ⅳ级的患者髓核组织样本纳入研究。按照纳入标准，共收集30例，分为Ⅲ级组和Ⅳ级组，每组各15例，qRT-PCR检测髓核组织中miR-223-5p的表达。比较miR-223-5p在两组患者髓核组织中的表达水平。
（2）取汇合度达到80%-90%的髓核细胞，使用转染试剂Lipofectamin2000将miR-223-5p mimics、miR-223-5p mimics control、miR-223-5p inhibitor、miR-223-5p inhibitor control分别转染髓核细胞，并设置空白对照组，培养48h后qRT-PCR检测转染率。将上述转染成功的髓核细胞根据实验要求的不同，进行不同的干预和处理，总共分为以下6组：空白组、LPS(脂多糖)组、LPS+miR-223-5p mimics control转染组（LPS+MC组）、LPS+miR-223-5p mimics转染组（LPS+Mim组）、LPS+inhibitor control转染组（LPS+IC组）、LPS+miR-223-5p inhibitor转染组（LPS+Inh组）。空白组中的髓核细胞只在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；除空白组外，其余5组均用终浓度为10μg/ml的LPS刺激髓核细胞，LPS刺激并培养髓核细胞48h后，ELISA检测各组髓核细胞上清中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平；qRT-PCR检测各组髓核细胞中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的表达水平；流式细胞术检测各组髓核细胞凋亡率。
（3）取汇合度达到80%-90%的髓核细胞，将髓核细胞分成5组并给予不同处理：空白组：只在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；LPS干预组4组，均向细胞培养液中加入LPS，调整LPS的终浓度为10μg/ml，构建椎间盘退变模型，将LPS干预组依次命名为LPS干预1组、LPS干预2组、LPS干预3组、LPS干预4组。以上5组细胞培养48小时后，用于后续中药干预。中药干预：将上述LPS刺激后的髓核细胞根据实验要求的不同，总共分为以下5组：空白组：上述空白组髓核细胞继续在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；模型组（LPS组）：将上述LPS干预1组的髓核细胞继续在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；LPS+低浓度组：向上述LPS干预2组的髓核细胞培养液中加入终浓度为40μg/ml黄芪甲苷+20μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞；LPS+中浓度组：向上述LPS干预3组的髓核细胞培养液中加入终浓度为80μg/ml黄芪甲苷+40μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞；LPS+高浓度组：向上述LPS干预4组的髓核细胞培养液中加入终浓度为120μg/ml黄芪甲苷+60μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞。将上述5组细胞培养48h后，qRT-PCR检测miR-223-5p在各组髓核细胞中的表达水平。
2.临床研究
按照纳入标准选取2018年01月至2019年08月因腰椎间盘突出症于我院行单侧腰椎椎板间扩大开窗髓核摘除术的患者共计70例，随机分为中药组和对照组，每组35例。中药组在术后常规治疗的基础上，给予黄芪丹参汤剂加甲钴胺片治疗；对照组在术后常规治疗的基础上，给予甲钴胺片治疗。术后随访6个月，于术前、术后第3天（用药前），药物治疗后1月、3月、6月分别对两组患者依据视觉模拟评分（VAS）、Oswestry功能障碍指数（ODI）进行疗效评价。
结果：
1.实验研究
（1）经统计学分析，两组病例的一般情况（性别、年龄、发病节段方面）无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。通过比较miR-223-5p在Pfirrmann分级Ⅲ级和Ⅳ级患者髓核组织中的表达，发现Ⅲ级组患者髓核组织中miR-223-5p的相对表达量明显高于Ⅳ级组患者（P＜0.05）。
（2）qRT-PCR检测miR-223-5p在髓核细胞中的转染率显示：miR-223-5p mimics转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量较空白组明显升高（P＜0.05）；miR-223-5p inhibitor转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量较空白组明显降低（P＜0.05）；miR-223-5p mimics control和miR-223-5p inhibitor control转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量与空白组比较无明显差异（P＞0.05），说明细胞转染成功，可以用于后续实验。LPS干预髓核细胞后，ELISA检测显示：LPS组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平与LPS组无明显差异（P＞0.05）。qRT-PCR检测显示：LPS组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量与LPS组无明显差异（P＞0.05）。流式细胞术检测髓核细胞凋亡率显示：LPS组细胞凋亡率明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中细胞凋亡率明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中细胞凋亡率明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中细胞凋亡率与LPS组无明显差异（P＞0.05）。
（3）黄芪甲苷及丹参酮ⅡA干预髓核细胞后，qRT-PCR检测显示：模型组（LPS组）中miR-223-5p的相对表达量明显低于空白组（P＜0.05）；与模型组相比，LPS+低浓度组、LPS+中浓度组、LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量均高于模型组（P＜0.05）；与LPS+低浓度组相比，LPS+中浓度组、LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量降低（P＜0.05）；与LPS+中浓度组相比，LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量降低（P＜0.05）。
2.临床研究
（1）经统计学分析，两组病例术前一般情况（性别、年龄、病程、发病节段方面）比较无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。
（2）术后第3天与术前相比两组患者的VAS评分、ODI评分较术前均明显下降（P＜0.05），差异有统计学意义；
（3）术后第3天（用药前），两组患者的VAS评分、ODI评分、手术时间、术中出血量比较无统计学差异（P＞0.05），组间具有可比性。两组患者药物治疗后各时间点VAS评分、ODI评分与药物治疗前（术后第3天）组内相比明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组间VAS评分比较，药物治疗1月后，中药组明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），药物治疗3月后、治疗6月后，两组患者VAS评分无明显差异（P＞0.05）。两组间ODI评分比较，药物治疗1月后、治疗3月后，中药组明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗6月后，两组患者ODI评分无明显差异（P＞0.05）。
结论：
1.miR-223-5p在退变椎间盘髓核组织中的表达可能与椎间盘退变程度有关，退变程度越重，miR-223-5p在髓核组织中表达越低。
2.miR-223-5p的高表达能够抑制髓核细胞炎症反应，减轻髓核细胞细胞外基质的降解，抑制髓核细胞的凋亡，从而减缓椎间盘退变，miR-223-5p低表达则作用相反。
3.黄芪丹参的主要组分黄芪甲苷及丹参酮IIA能够促进退变椎间盘髓核细胞中miR-223-5p的表达，且低浓度促进效果最好，随药物浓度的升高，促进效果逐渐减弱；结合前两步结论可得，通过促进退变椎间盘髓核细胞中miR-223-5p的表达可以抑制髓核细胞炎症反应，减轻髓核细胞细胞外基质的降解，抑制髓核细胞的凋亡，来影响髓核细胞功能，从而减缓椎间盘退变。
4.单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术可以明显缓解腰椎间盘突出症患者的疼痛、促进功能恢复。
5.术后给予中药黄芪丹参汤剂治疗后，在短期内能进一步缓解术后腰背部及下肢残余痛、促进功能恢复。
6.“益气活血”理论在促进因腰椎间盘突出症行单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术的患者术后恢复方面具有指导意义。
1.研究益气活血经典“药对”黄芪丹参的主要组分黄芪甲苷及丹参酮IIA对microRNA-223-5p（miR-223-5p）在退变腰椎间盘表达及髓核细胞功能的影响。
2.临床中观察黄芪丹参“药对”联合单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。
方法：
1.实验研究
（1）根据椎间盘退变磁共振Pfirrmann分级，术中收集退变程度为Ⅲ级和Ⅳ级的患者髓核组织样本纳入研究。按照纳入标准，共收集30例，分为Ⅲ级组和Ⅳ级组，每组各15例，qRT-PCR检测髓核组织中miR-223-5p的表达。比较miR-223-5p在两组患者髓核组织中的表达水平。
（2）取汇合度达到80%-90%的髓核细胞，使用转染试剂Lipofectamin2000将miR-223-5p mimics、miR-223-5p mimics control、miR-223-5p inhibitor、miR-223-5p inhibitor control分别转染髓核细胞，并设置空白对照组，培养48h后qRT-PCR检测转染率。将上述转染成功的髓核细胞根据实验要求的不同，进行不同的干预和处理，总共分为以下6组：空白组、LPS(脂多糖)组、LPS+miR-223-5p mimics control转染组（LPS+MC组）、LPS+miR-223-5p mimics转染组（LPS+Mim组）、LPS+inhibitor control转染组（LPS+IC组）、LPS+miR-223-5p inhibitor转染组（LPS+Inh组）。空白组中的髓核细胞只在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；除空白组外，其余5组均用终浓度为10μg/ml的LPS刺激髓核细胞，LPS刺激并培养髓核细胞48h后，ELISA检测各组髓核细胞上清中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平；qRT-PCR检测各组髓核细胞中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的表达水平；流式细胞术检测各组髓核细胞凋亡率。
（3）取汇合度达到80%-90%的髓核细胞，将髓核细胞分成5组并给予不同处理：空白组：只在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；LPS干预组4组，均向细胞培养液中加入LPS，调整LPS的终浓度为10μg/ml，构建椎间盘退变模型，将LPS干预组依次命名为LPS干预1组、LPS干预2组、LPS干预3组、LPS干预4组。以上5组细胞培养48小时后，用于后续中药干预。中药干预：将上述LPS刺激后的髓核细胞根据实验要求的不同，总共分为以下5组：空白组：上述空白组髓核细胞继续在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；模型组（LPS组）：将上述LPS干预1组的髓核细胞继续在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理；LPS+低浓度组：向上述LPS干预2组的髓核细胞培养液中加入终浓度为40μg/ml黄芪甲苷+20μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞；LPS+中浓度组：向上述LPS干预3组的髓核细胞培养液中加入终浓度为80μg/ml黄芪甲苷+40μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞；LPS+高浓度组：向上述LPS干预4组的髓核细胞培养液中加入终浓度为120μg/ml黄芪甲苷+60μg/ml丹参酮ⅡA溶液培养髓核细胞。将上述5组细胞培养48h后，qRT-PCR检测miR-223-5p在各组髓核细胞中的表达水平。
2.临床研究
按照纳入标准选取2018年01月至2019年08月因腰椎间盘突出症于我院行单侧腰椎椎板间扩大开窗髓核摘除术的患者共计70例，随机分为中药组和对照组，每组35例。中药组在术后常规治疗的基础上，给予黄芪丹参汤剂加甲钴胺片治疗；对照组在术后常规治疗的基础上，给予甲钴胺片治疗。术后随访6个月，于术前、术后第3天（用药前），药物治疗后1月、3月、6月分别对两组患者依据视觉模拟评分（VAS）、Oswestry功能障碍指数（ODI）进行疗效评价。
结果：
1.实验研究
（1）经统计学分析，两组病例的一般情况（性别、年龄、发病节段方面）无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。通过比较miR-223-5p在Pfirrmann分级Ⅲ级和Ⅳ级患者髓核组织中的表达，发现Ⅲ级组患者髓核组织中miR-223-5p的相对表达量明显高于Ⅳ级组患者（P＜0.05）。
（2）qRT-PCR检测miR-223-5p在髓核细胞中的转染率显示：miR-223-5p mimics转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量较空白组明显升高（P＜0.05）；miR-223-5p inhibitor转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量较空白组明显降低（P＜0.05）；miR-223-5p mimics control和miR-223-5p inhibitor control转染髓核细胞后miR-223-5p相对表达量与空白组比较无明显差异（P＞0.05），说明细胞转染成功，可以用于后续实验。LPS干预髓核细胞后，ELISA检测显示：LPS组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平均明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9的表达水平与LPS组无明显差异（P＞0.05）。qRT-PCR检测显示：LPS组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量均明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-9、caspase-3的相对表达量与LPS组无明显差异（P＞0.05）。流式细胞术检测髓核细胞凋亡率显示：LPS组细胞凋亡率明显高于空白组（P＜0.05）；LPS+Mim组中细胞凋亡率明显低于LPS组（P＜0.05）；LPS+Inh组中细胞凋亡率明显高于LPS组（P＜0.05）；LPS+MC组和LPS+IC组中细胞凋亡率与LPS组无明显差异（P＞0.05）。
（3）黄芪甲苷及丹参酮ⅡA干预髓核细胞后，qRT-PCR检测显示：模型组（LPS组）中miR-223-5p的相对表达量明显低于空白组（P＜0.05）；与模型组相比，LPS+低浓度组、LPS+中浓度组、LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量均高于模型组（P＜0.05）；与LPS+低浓度组相比，LPS+中浓度组、LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量降低（P＜0.05）；与LPS+中浓度组相比，LPS+高浓度组中miR-223-5p的相对表达量降低（P＜0.05）。
2.临床研究
（1）经统计学分析，两组病例术前一般情况（性别、年龄、病程、发病节段方面）比较无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。
（2）术后第3天与术前相比两组患者的VAS评分、ODI评分较术前均明显下降（P＜0.05），差异有统计学意义；
（3）术后第3天（用药前），两组患者的VAS评分、ODI评分、手术时间、术中出血量比较无统计学差异（P＞0.05），组间具有可比性。两组患者药物治疗后各时间点VAS评分、ODI评分与药物治疗前（术后第3天）组内相比明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组间VAS评分比较，药物治疗1月后，中药组明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），药物治疗3月后、治疗6月后，两组患者VAS评分无明显差异（P＞0.05）。两组间ODI评分比较，药物治疗1月后、治疗3月后，中药组明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗6月后，两组患者ODI评分无明显差异（P＞0.05）。
结论：
1.miR-223-5p在退变椎间盘髓核组织中的表达可能与椎间盘退变程度有关，退变程度越重，miR-223-5p在髓核组织中表达越低。
2.miR-223-5p的高表达能够抑制髓核细胞炎症反应，减轻髓核细胞细胞外基质的降解，抑制髓核细胞的凋亡，从而减缓椎间盘退变，miR-223-5p低表达则作用相反。
3.黄芪丹参的主要组分黄芪甲苷及丹参酮IIA能够促进退变椎间盘髓核细胞中miR-223-5p的表达，且低浓度促进效果最好，随药物浓度的升高，促进效果逐渐减弱；结合前两步结论可得，通过促进退变椎间盘髓核细胞中miR-223-5p的表达可以抑制髓核细胞炎症反应，减轻髓核细胞细胞外基质的降解，抑制髓核细胞的凋亡，来影响髓核细胞功能，从而减缓椎间盘退变。
4.单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术可以明显缓解腰椎间盘突出症患者的疼痛、促进功能恢复。
5.术后给予中药黄芪丹参汤剂治疗后，在短期内能进一步缓解术后腰背部及下肢残余痛、促进功能恢复。
6.“益气活血”理论在促进因腰椎间盘突出症行单侧椎板间扩大开窗髓核摘除术的患者术后恢复方面具有指导意义。