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目的：培养Ishikawa细胞株及转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株,探讨HER-2/neu对雌激素依赖性子宫内膜癌细胞信号通路(MAPK/ERK、PI3K/Akt)调控的研究。
方法：
1、应用细胞培养技术对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞株及转染HER-2/neu的Ishikawa细胞进行培养；
2、表皮生长因子(Endothelial Growth Factor)处理Ishikawa细胞株及转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株,Western-blot检测转染细胞前后COX-2的表达；t-Akt及p-Akt蛋白;t-ERK及p-ERK。ELISA方法检测细胞培养上清液中雌二醇的含量；
3、用PI3 K/Akt的抑制剂LY294002抑制信号通路,以不同时间(浓度为20umol/L时,分别作用10 min、20 min、30 min和60 min)和不同浓度(5 umol/L、10 umol/L、20 umol/L和40 umol/L)作用后30 min后,Western-blot检测COX-2的表达水平、ELISA检测雌二醇水平。用MAPK/ERK的抑制剂PD98059抑制信号通路,以不同时间(浓度为50 umol/L时,分别作用10 min、20 min、30 min和60 min)和不同浓度(5 umol/L、10 umol/L、50 umol/L和100 umol/L)作用30min后,Western-blot检测COX-2的表达水平、ELISA检测雌二醇水平；
4、用SPSS统计软件对结果进行统计分析,并结合实验结果分析HER-2/neu对MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路调控的作用进行分析,以探讨HER-2/neu与雌激素依赖性子宫内膜癌的相关性。
结果:
1、转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株COX-2蛋白、p-Akt蛋白、p-ERK及细胞上清液中的雌二醇的含量均高于正常的Ishikawa细胞株(P＜0.05)；
2、应用抑制剂分别抑制上述两种通路,转染HER-2/neu的Ishikawa细胞株中COX-2的表达水平低于转染前Ishikawa细胞株,同时转染后细胞上清液中雌二醇的含量亦低于转染前细胞,(P＜0.05)；随药物浓度的增加及作用时间的延长,两组细胞COX-2及雌二醇的表达均逐渐减少,且抑制作用与浓度及作用时间呈负依赖关系。
结论:子宫内膜癌Ishikawa细胞株HER-2/neu基因表达的增强进一步引起COX-2、E2表达的增加,该结果可能通过MAPK/ERK、PI3K/Akt对信号通路的调控而实现的。