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目的:防治缺血性神经细胞凋亡是目前缺血性中风治疗中的研究热点,中西医均在寻找解决途径。我们的临床研究表明:黄角颗粒对急性期脑梗死有较好的临床疗效。为了观察黄角颗粒对缺血性神经细胞凋亡的拮抗作用并探讨其可能作用机制,为该药临床应用提供坚实的理论依据,设计了本实验。 方法:动物及分组:选用60只健康Wister老年大鼠,雌雄各半,体重300±20g,随机分为六组:即正常组,模型组,中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组,尼莫地平对照组。造模及给药方法:造模前30分钟,中药大、中、小剂量组分别用100%,50%,25%黄角颗粒水溶液按10g/Kg,5g/Kg,2.5g/Kg体重灌胃,尼莫地平对照组用1%的尼莫地平水溶液按10mg/Kg体重灌胃,模型组与正常组用0.9%生理盐水按10ml/Kg体重灌胃。除正常组外,其余各组大鼠采用大脑中动脉线栓法动物模型。取材及检测方法:造模24小时后,断头处死大鼠,取大脑用TUNEL法检测大脑皮层神经细胞凋亡数量变化;用免疫组化法检测大脑皮层中Fas、Caspase-3,bcl-2,bax抗原表达情况;取血测血浆中SOD,MDA,TNF-a,NO含量的变化;HE染色观察大脑皮层显微结构变化;透射电镜观察大脑皮层超微结构变化。统计方法:组间差异用方差分析,各组间比较用Q检验。 结果: 1 模型组大鼠脑组织凋亡阳性细胞数显著高于正常组(P<0.01);中药大、中、小剂量组及西药组大鼠脑组织凋亡阳性细胞数显著低于模型组(均P<0.01);中药大剂量组大鼠脑组织凋亡阳性细胞数与西药组间无显著性差异(P>0.05)。中药大剂量组大鼠脑组织凋亡阳性细胞数显著低于中药中、小剂量组(P<0.05,P<0.01) 2 模型组大鼠脑组织bax,bcl-2阳性细胞数显著高于正常组,bcl-2/bax比值显著低于正常组(均P<0.01);中药大、中、小剂量组及西药组大鼠脑组织bax阳性细胞数显著低于模型组,bcl-2阳性细胞数及bcl-2/bax比值显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);中药大剂量组大鼠脑组织bax、bcl-2阳性细胞数与西药组间无显著性差异(P>0.05),中药大剂量组bcl-2/bax比值显著高于西药组(P<0.01)。中药大剂量组大鼠脑组织bax阳性细胞数显著低于中药中、小剂量,bcl-2阳性细胞数及bcl-2/bax比值显著高于中药中、小剂量(P<0.05,P<0.01)。 3 模型组大鼠脑组织Caspase-3、Fas阳性细胞数显著高于正常组(均P<0.01);中药大、中、小剂量组及西药组大鼠脑组织Caspase-3、Fas阳性 博士学位论文细胞数显著低于模型组(P<0.肠,P<0.01);中药大剂量组大鼠脑组织Caspase一3、FaS阳性细胞数与西药组间无显著性差异(P>0.05);中药大剂量组大鼠脑组织Caspase一3、FaS阳性细胞数显著低于中药中、小剂量组(均P(0 .01)。4模型组大鼠血浆MDA,TNF一a,NO含量显著高于正常组,SOD值显著低于正常组(均P<0.01);中药大、中、小剂量组及西药组血浆MDA,TNF一a,NO值显著低于模型组,500值显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);中药大剂量组大鼠血浆soD值显著高于西药组,血浆No值显著低于西药组(均P<0.05);中药大剂量组血浆MDA,TNF一a值与西药组间无显著性差异(P>0.05入中药大剂量组血浆TNF一a,NO,MDA值显著低于中药中、小剂量组,SOD值显著高于中药中、小剂量组(p<0.05,p<0.01)。5病理学观察:光镜及电镜下显示模型组大鼠局部脑组织细胞有明显的凋亡现象;中药大、中、小剂量组及对照组大鼠局部脑组织凋亡均有明显的改善。结论:从形态结构、细胞、蛋白质及基因等不同水平论证了黄角颗粒抗MCAO大鼠急性缺血性神经细胞凋亡及其可能作用机制。研究发现急性脑缺血后可以引起明显的神经细胞凋亡,而黄角颗粒有明显的抗凋亡作用,其作用优于尼莫地平,并呈剂量依赖性关系。其作用机理可能与抗自由基损伤,提高bcl一z/baxL匕值,上调bcl一2表达,下调bax,Fas,easpase一3表达,降低TNF一a,NO等损伤因子的含量有关。抗急性缺血性神经细胞凋亡是黄角颗粒治疗急性缺血性中风的机制之一。