目的:在Aβ_25-35诱导人源性SH-SY5Y损伤细胞上,筛选能差异化表达并与MRTF-A相关的miRNA,探讨MRTF-A介导miRNA对Aβ_25-35诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响及机制。方法:1.在Aβ_25-35诱导SH-SY5Y损伤细胞模型中,用基因芯片筛选与MRTF-A调控相关的miRNA:建立细胞模型;细胞分组(control,Aβ_25-35,MRTF-A,MRTF-A+Aβ_25-35)。转染MRTF-A质粒48h后,给予40μmol/L Aβ_25-35处理,24h后,用western blot方法检测MRTF-A的蛋白表达水平,并提取RNA。用Agilent RNA 6000 Nano/Pico Assay法检测各组RNA质量合格后,使用miRNA One Array芯片技术分析各组中发生显著差异变化的miRNA。得到各组显著变化的miRNA,再通过各组间相互比较得到MRTF-A调控的miRNA。筛选出差异性表达最为显著的miRNA,并用RT-q PCR检测MRTF-A对目标miRNA的调控作用。2.MRTF-A对Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞自噬的影响及机制:1)MRTF-A对细胞自噬的影响:实验分为4组(control,Aβ_25-35,MRTF-A,MRF-A+Aβ_25-35)。转染MRTF-A质粒48h后,给予40μmol/L Aβ_25-35处理24h,提取蛋白,检测自噬相关基因LC3和Beclin1的蛋白表达水平。2)miR-1273g-3P对细胞自噬的影响:实验分为4组(miR-1273g-3p mimic control,miR-1273g-3p mimic,miR-1273g-3p mimic control+Aβ_25-35,miR-1273g-3p mimic+Aβ_25-35)。转染miR-1273g-3p 48h后,给予40μmol/L Aβ_25-35处理24h,提取蛋白检测LC3和Beclin1的蛋白表达水平。3)MRTF-A对自噬的作用与miR-1273g-3p有关:实验分为5分组(control,Aβ_25-35,MRTF-A+Aβ_25-35,MRTF-A+miR-1273g-3p inhibitor control+Aβ_25-35,MRTF-A+miR-1273g-3p inhibitor+Aβ_25-35)。单独转染MRTF-A或者共转染miR-1273g-3p inhibitor 48h后,给予Aβ_25-35处理24h后,提取蛋白,检测自噬相关基因LC3和Beclin1的蛋白表达水平。4)miR-1273g-3p对靶基因m TOR的作用:采用mirwalk、targetscan软件预测其靶基因,并验证其对靶基因（自噬上游靶基因）m TOR表达的影响。实验分为2组（miR-1273g-3p mimic control,miR-1273g-3p mimic）;转染miR-1273g-3p mimic 48h后,提取RNA和蛋白,分别检测m TOR蛋白表达水平。5)MRTF-A对自噬的作用与miR-1273g-3p抑制m TOR有关:实验分为5组(control,Aβ_25-35,MRTF-A,MRTF-A+Aβ_25-35,MRTF-A+miR-1273g-3p inhibitor control+Aβ_25-35,MRTF-A+miR-1273g-3p inhibitor+Aβ_25-35)。单独转染MRTF-A或者共转染miR-1273g-3p inhibitor 48h后,给予40μmol/L Aβ_25-35处理24h,提取蛋白,检测m TOR的蛋白表达水平。结果:1.基因芯片筛选miRNA:在给予Aβ_25-35处理的SH-SY5Y细胞中,MRTF-A蛋白表达水平明显降低,转染MRTF-A质粒使细胞过表达MRTF-A,将各组通过RNA质检的RNA进行miRNA基因芯片杂交,依据|Fold change|≧0.585且P-value<0.05的条件筛选条件,共筛选出295个显著差异的miRNA。将得到的295个miRNA在各组间交集比较,共得到8个与MRTF-A调控相关的miRNA;其中上调的有miR-1273g-3p,下调的有hsa-miR-6772-3p、hsa-miR-6736-3p、hsa-miR-6740-3p、hsa-miR-7106-3p、hsa-miR-6747-3p、hsa-miR-6776-3p及hsa-miR-3653-5p。我们选择上调明显的miR-1273g-3p,用RT-q PCR验证显示MRTF-A能明显上调miR-1273g-3p的表达,与芯片结果一致。2.MRTF-A调控miR-1273g-3p促进Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞自噬的发生:结果显示,在Aβ_25-35处理的SH-SY5Y细胞中,过表达MRTF-A能明显增加LC3II/LC3I蛋白表达的比率和Beclin1的蛋白表达,说明MRTF-A促进经Aβ_25-35处理的SH-SY5Y细胞自噬的发生;在Aβ_25-35处理的SH-SY5Y细胞中,转染miR-1273g-3p mimic也能明显促进LC3II/LC3I蛋白表达的比率和Beclin1的蛋白表达,表明miR-1273g-3p也能够促进自噬的发生;在Aβ_25-35处理的SH-SY5Y细胞中,共转染MRTF-A及miR-1273g-3p inhibitor后,LC3II/LC3I蛋白表达的比率和Beclin1的蛋白表达较单转MRTF-A有明显降低,提示miR-1273g-3p参与了MRTF-A促进自噬的的作用。3.MRTF-A促进自噬发生的机制可能是通过上调miR-1273g-3p,从而抑制其靶基因m TOR表达实现:利用mirwallk、Targetscan软件总共预测到1090个miR-1273g-3p靶基因,并找到负性调控自噬的靶基因m TOR。RT-q PCR和western blot结果显示,单转miR-1273g-3p能明显抑制了m TOR的m RNA和蛋白表达水平;另一方面,单转MRTF-A也能抑制m TOR的表达,而共转MRTF-A及miR-1273g-3p inhibitor后能逆转MRTF-A对m TOR表达的上调,提示MRTF-A促进自噬发生的机制可能是通过上调miR-1273g-3p,从而抑制其靶基因m TOR表达实现。结论:MRTF-A能够促进Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞自噬的发生,而miR-1273g-3p通过抑制m TOR的表达促进细胞自噬的发生;另一方面,MRTF-A能够上调miR-1273g-3p的表达,MRTF-A促进Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞自噬可能与其上调miR-1273g-3p抑制m TOR的表达相关。