当前,我国猪疫病的流行现状是:旧病未除、新病又生,多种猪疫病病毒混合感染,猪疫病的监测和诊断难度也随之增加。传统的猪疫病病原诊断方法由于其检测手段单一,操作繁琐,达不到养殖业监测的需求。近几年发展起来的寡核苷酸芯片技术,其灵敏度高,通量大,能同时检测多种病原,但该技术对实验条件的要求较高,检测成本高,极大的限制了该技术在猪疫病病原检测方面的应用。针对该缺陷,本研究在原有的寡核苷酸芯片技术的基础上,结合纳米金标记技术和金银染色技术,针对当前危害严重的猪疫病病原,制备一款简便、快速、检测成本低的病原检测芯片,以利于猪疫情的监测。　　 本研究以猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪流感病毒、口蹄疫病毒、猪瘟病毒及猪繁殖与呼吸综合症病毒七种危害较大的猪疫病病原作为研究对象。在本实验室原有的研究基础上,将一段共有序列连接在原有七种病毒的上游或下游引物5’端,采用多重PCR的方法,扩增出带有共有序列的各种病毒的目的片段,同时在该PCR过程中引入纳米金标记的该共有序列做为通用引物,即可得到扩增出带有纳米金标记的各种病毒的核酸片段。经过扩增的PCR产物与点制好的寡核苷酸芯片杂交后,通过金银染色,就可在特定区域产生肉眼可见的杂交信号。　　 通过实验摸索,我们优化了标记纳米金的最佳引物用量,多重PCR扩增条件,上下游引物与纳米金标记的通用引物最佳用量,点样探针浓度,杂交缓冲液中SDS浓度以及银染时间等条件,建立了利用Au-DNA PCR扩增的目视化猪疫病病毒基因芯片。优化后的条件为:标记1 mL10nm纳米金(A520=0.842)的巯基引物的用量为1.2μg,上下游引物的浓度为1μmol/L,标记好的纳米金.引物复合物用量为5μL,PCR扩增退火温度为56℃,循环32次,杂交缓冲液中SDS的浓度为0.1％,杂交时间1h,银染时间6-8min。同时本研究探讨了七种猪疫病病毒检测的灵敏度,在混合杂交时,可以得出该款芯片的七种病毒实际检测限分别为:PCV:8个拷贝数/μL；PPV:2个拷贝数/μL；PRv:20个拷贝数/μL:SIV:75个拷贝数/μL；CSFV:80个拷贝数/μL；FMDV:120个拷贝数/μL；PRRSV:50个拷贝数/μL。本研究还对小量实际样本进行了检测,结果与病毒分离和培养方法的鉴定结果无明显区别。　　 以上实验结果显示该芯片的检测灵敏度高,特异性好,检测成本低,操作简便,适合于养猪业规模化生产中大量样本的猪疫病病毒监测,具有较好的应用前景。