碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是重要的血管生成因子之一,与肿瘤的发生发展密切相关。在本实验室已克隆bFGF基因基础上,本研究构建了带有6个His标签的bFGF原核表达质粒pET28a—bFGF,转入大肠杆菌中表达,发现bFGF蛋白以可溶和包涵体两种形式存在。通过对培养基、IPTG浓度、诱导时间、宿主菌的优化,将bFGF蛋白表达量提高至菌体总蛋白的30％上。使用Ni离子亲和层析方法纯化蛋白,蛋白纯度达到90％以上。利用纯化后的蛋白免疫家兔,经4次免疫获得了抗血清,抗体终效价达到1:819200。Protein G亲和纯化抗血清,利用纯化的bFGF多克隆抗体和商品化bFGF单克隆抗体,初步建立了bFGF夹心ELISA检测方法。对从医院采集的50名健康人和50名肿瘤患者的血清bFGF含量进行了检测。设定27pg／ml为cut-off值,发现肿瘤患者血清bFGF的阳性检出率(68％)明显高于健康人(10％),且两组检测数据差异具有显著统计学意义(P<0.01)。提示血清bFGF与肿瘤的发生、发展密切相关。　　 本研究利用基因工程手段,制备了人重组bFGF蛋白和多克隆抗体,初步建立了检测bFGF的双抗体夹心ELISA方法,并将其应用于临床血清检测,为开发基于bFGF的肿瘤辅助诊断试剂奠定了基础。