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目的:研究稳定期慢性阻塞性疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)患者和急性加重期COPD(Acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者2型固有淋巴细胞(Type 2 innate lymphoid cells,ILC2)、辅助性T细胞1(Helper T cell 1,Th1)、辅助性T细胞2(Helper T cell 2,Th2)及其相关炎性因子的变化规律,探索COPD不同病程中ILC2细胞的变化特点及其参与COPD病程的可能原因;观察COPD不同病程中Th1、Th2及Th1/Th2平衡变化情况,分析ILC2与Th1/Th2平衡的关系;通过体外共培养实验探索ILC2对AECOPD适应性Th2免疫反应可能的调节机制。方法:1)采集临床资料,收集2017年1月至2018年12月期间新疆医科大学附属中医医院门诊及住院COPD患者的外周血和血清,其中AECOPD患者98例,稳定期COPD患者112例,以110例同一时期至新疆医科大学附属中医医院体检的健康志愿者(Healthy control,HC)作为健康对照组;2)使用流式细胞术检测稳定期COPD组,AECOPD组和健康对照组外周血中ILC2细胞、ST2~+ILC2、CD80~+ILC2、CD86~+ILC2、OX40L~+ILC2、MHCⅡ~+ILC2细胞的变化,检测外周血或培养后Th1,Th2细胞的变化;3)采用磁珠法依次分选AECOPD患者外周血ILC2细胞、健康对照组CD4~+T细胞,分别对其进行单独培养或加入不同因子作用后共培养;4)采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)法检测稳定期COPD组、AECOPD组和健康对照组血清或培养上清中白细胞介素-33(Interleukin-33,IL-33)、可溶性ST2(Solution ST2,sST2)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-5(Interleukin-5,IL-5)、白细胞介素-13(Interleukin-13,IL-13)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)的表达变化情况;5)采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测稳定期COPD组、AECOPD组和健康对照组ILC2细胞和相关因子前列腺素D2受体/表达在Th2细胞上的趋化因子受体同源分子(Chemoattractant receptor homologous molecule expressed on Th2 cell,CRTH2)、维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)、GATA结合因3(GATA-binding factor 3,GATA3)、IL-33受体生长刺激表达基因2蛋白(Growth Stimulation expressed gene 2,ST2)转录水平变化情况,Notch-GATA3信号途径中相关因子Notch、hes1、GATA3转录水平变化情况,共培养ILC2细胞分化抑制因子(Inhibitor of differentiation,ID2)转录水平变化情况;6)Western-Blot法测定Notch-GATA3信号途径中相关因子Notch、hes1、GATA3蛋白的表达情况,测定ILC2细胞ID2转录水平变化情况。结果:1)COPD患者外周血清中IL-33、IL-5、IL-6和IL-13显著升高,COPD患者外周血中ILC2的比例显著升高,ILC2相关核转录因子GATA3、RORA mRNA表达增加,LC2ST2~+占比显著增加;50ng/mLIL-33体外刺激48h时Lin~-CD45~+CD127~+CRTH2~+细胞占比最高,同时细胞因子IL-4、IL-6、IL-5和IL-13显著增加;2)与稳定期COPD组和健康对照组相比,AECOPD外周血中Th2细胞的数量及血清中IL-4的表达量明显增加,Th2/Th1比值增加,流式细胞和荧光定量结果表明AECOPD组外周血中ILC2细胞的数量及其相关转录因子的表达均显著增加,CD80~+ILC2细胞数量和MHCⅡ~+ILC2细胞数量显著增加,且MHCⅡ~+ILC2细胞的占比与Th2细胞的占比显著正相关。ILC2:CD4~+T共培养组中Th2细胞的数量及相关细胞因子IL-4、IL-5和IL-13的含量显著增加;ILC2+Anti-MHCⅡ:CD4~+T共培养组中上述指标均下降,而IFN-γ在各共培养组中无显著变化;3)ILC2细胞经IL-33刺激后Notch受体和胞内HES1mRNA及蛋白水平均增加,经Notch配体Jagged1刺激后,Notch受体、胞内HES1、NF-κBmRNA和蛋白水平增加显著,这种作用在IL-33和Notch配体Jagged1联合刺激后表达量增加到最高。另外,ILC2细胞核转录因子ID2和GATA3在IL-33刺激组、Notch配体Jagged1刺激组和IL-33+Notch配体Jagged1刺激组中均显著增加,并且在IL-33+Notch配体Jagged1刺激组表达量最高。Notch信号通路阻断后Notch受体、胞内HES1、NF-κBmRNA和蛋白水平表达下降,同时ILC2细胞核转录因子ID2和GATA3在DAPT阻断组或IL-33+DAPT阻断组中表达下降。ELISA检测发现,IL-33刺激组,Notch刺激组和IL-33+Notch刺激组中IL-4、IL-5及IL-13的表达水平也显著增加,这种作用在加入DAPT后细胞因子的表达水平显著降低。ILC2细胞同CD4~+T细胞共培养后,IL-33刺激组、Notch激活组和IL-33+Notch激活组Th2细胞的数量较单独培养组明显增加,尤以IL-33+Notch激活组Th2细胞的数量增加最为明显。结论:1)AECOPD组外周血血清中IL-33、sST2显著高于稳定期COPD组和健康对照组,AECOPD组外周血ILC2细胞数量及其关键核转录因子RORα和GATA3mRNA、CRTH2mRNA的相对表达量显著升高,IL-4、IL-6、IL-13等Th2型细胞因子含量也明显增加,表明,IL-33和ILC2细胞均参与AECOPD病程,在AECOPD病程Th2型免疫反应中起重要作用;2)COPD不同病程中存在Th1/Th2免疫平衡,在稳定期COPD中Th1/Th2免疫平衡向Th1方向偏移,以Th1型免疫反应为主;在AECOPD病程中Th1/Th2免疫平衡向Th2方向偏移,以Th2型免疫反应为主。初步检测并结合体外实验证实,AECOPD组外周血中ILC2细胞能表达共刺激分子CD80并发挥部分抗原提呈细胞(Antigen presenting cell,APC)的功能表达MHCⅡ类分子调控CD4~+T细胞的分化,可能对促进AECOPDTh2型免疫反应起到了十分重要的作用;3)通过使用磁珠法分选AECOPD患者的ILC2细胞,并对其进行Notch信号通路的干预和IL-33重组细胞因子的刺激,对ILC2细胞经Notch-GATA3信号通路对COPD适应性免疫反应调控的机制进行研究,结果表明,Notch的激活能促进ILC2细胞核转录因子ID2和GATA3的高表达,促进Th2型细胞因子的表达,进而以促进ILC2细胞的增殖和活化的方式调控COPD不同病程中适应性免疫应答的偏移。