山茱萸是山茱萸科落叶小乔木或者灌木Cornus Officinalis Sieb. et Zucc的成熟果肉,别名枣皮,山芋肉。主产于陕西、河南、浙江海拔400-2000米处山地。山茱萸作为中药始载于《神农本草经》。性微温,味酸。归肝、肾经。可补益肝肾,涩精固脱。临床用于治疗肝肾亏虚之眩晕耳鸣、腰膝酸软、崩漏带下、遗精遗尿、体虚大汗等症。山茱萸中含有萜类、鞣质、黄酮、有机酸等多种成分,具有抗氧化、抗炎、保护神经和心血管以及防治糖尿病的生物活性。本课题在化学成分、分析方法和生物活性方面对山茱萸进行了研究。主要内容如下：一山茱萸化学成分的提取分离本课题建立了一套以逆流色谱技术为主体,其他方法辅助的系统分离方案,对山茱萸的化学成分进行分离。采用逆流色谱在不同洗脱模式下(常规反相模式、双向洗脱模式、常规正相模式以及洗脱—推出模式)对山茱萸提取物进行了4步分离,剩余的提取物再以其他方法包括反相ODS硅胶、制备型高效液相色谱和制备型薄层色谱法进行分离,共得到并鉴定了32个化合物,采用波谱方法鉴定化学结构。分别是：马钱苷(Loganin,1)、獐牙菜苷(Sweroside,2)、莫诺苷(Morroniside,3)、没食子酸(Gallic acid,4)、金吉苷(Kingiside,5)、马钱酸(Loganic acid,6)10-羟基山茱萸苷(10-hydroxycornin,7)、7-脱氢马钱苷(7-ketologanin,8)、7-氧-乙基莫诺苷(7-O-methylmorroniside,9)、山茱萸新苷Ⅰ(Cornuside I,10)、表金吉苷(8-epikingiside,11)、裂环氧化马钱酸(secologanoside,12)、10-羟基戟叶马鞭草苷(10-hydroxyhastatoside,13)、戟叶马鞭草苷(Hastatoside,14)、二氢山茱萸苷(Dihydrocornin,15)、獐牙菜苦苷(Swertimarin,16)、裂环马钱苷(Secologanin,17)、山茱萸苷(Cornin,18)、7-氧-甲基莫诺苷(7-O-methylmorroniside,19)、山茱萸新苷Ⅱ (Cornuside Ⅱ,20)、阿江榄仁葡萄糖苷Ⅱ (Arjunglucoside Ⅱ,21)、脱水莫诺苷元(Dehydromorroniside aglycone,22)、齐墩果酸(Oleanolic acid,23)、乌索酸(Ursolic acid,24)、7-O-没食子酰-D-景天庚酮糖(7-O-galloyl-D-sedoheptulose,25)、株木鞣质B (Cornusiin B,26)、Mevaloside (27)、1,2,3-三-O-没食子酰-D-葡萄糖(1,2,3-tri-O-galloyl-β-D-glucose,28)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Quercetin3-O-β-D-Glucuronide,29)、逆没食子酸(Ellagic acid,30)(3beta)-pregna-5,16,20-triene-3,20-diyl diacetate (31)、Eudesma-5,11(13)-dien-8,12-olide(32)。这些化合物分别属于环烯醚萜(1-3,5-20,22)、五环三萜(21,23,24)、单萜(27)和倍半萜(32)、鞣质(25,26,28)、酚酸(4,30)、黄酮(29)、甾体(31)。其中9个化合物：5、7、11、12、14、16、17、31和32为首次从该种植物中分离得到。二山茱萸成分分析方法的建立环烯醚萜类化合物在山茱萸中含量较高并具有很多生物活性,是山茱萸的特征性成分。本实验建立了两种同时测定山茱萸中8种坏烯醚萜苷含量的方法：(1)高效毛细管电泳-紫外联用法(HPCE-UV),(2)超高效液相色谱—串联质谱联用法(UPLC-MS/MS),对山茱萸中莫诺苷、7-脱氢马钱苷、獐牙菜苷、马钱苷、7-氧-甲基莫诺苷、山茱萸新苷Ⅱ、7-氧-乙基莫诺苷和山茱萸新苷Ⅰ进行了定量分析。同时,基于17批不同产地和采收期的山茱萸药材,建立了山茱萸的超高效液相色谱-光电二极管阵列(UPLC-PDA)标准指纹图谱。从这些图谱中提取数据,对不同来源的样品进行了相似度分析和分级聚类分析,结合特征性成分含量测定结果,考察采收期和产地对山茱萸内在质量的影响。结果表明,多成分含量测定结合指纹图谱分析是一种可靠的药材鉴别和质量评估方法。三山茱萸萜类成分的生物活性研究萜类化合物是山茱萸中最主要的成分。本实验首先考察了从山茱萸中分离得到的19个萜类成分对两种神经胶质瘤细胞(LN229和U87细胞系)增殖情况的影响。发现其中的两个五环三萜类成分——齐墩果酸和乌索酸具有显著抑制神经胶质瘤细胞存活率的作用。齐墩果酸的IC50是12μM (LN229细胞)和25μM(U87细胞),乌索酸的IC50是25μM (LN229细胞)和35μM(U87细胞),并且均呈现明显的量效关系。考察了山茱萸总环烯醚萜苷和单一环烯醚萜苷成分莫诺苷的抗血栓作用。采用尾静脉注射去甲肾上腺素和牛血清蛋白,造成大鼠血栓前状态模型,对模型大鼠进行病理性血栓诱发实验(电刺激颈动脉),评估药物对血栓生成的影响。结果表明,山茱萸总苷和莫诺苷可以不同程度的抑制病理性血栓的形成,延长血管完全阻塞时间,降低生成的血栓重量。二者均可以降低血栓前状态模型大鼠体内血栓素A2和血清素的水平,升高前列环素12的含量,从而抑制血小板聚集并使血管舒张。同时山茱萸总苷通过提高组织因子途径抑制物水平,抑制外源性凝血途径。而莫诺苷可以升高血液中纤溶酶水平,增强机体纤溶功能。此外,山茱萸总苷和莫诺苷对血栓前状态模型大鼠出、凝血时间的延长程度不超出正常范围,对血小板计数无影响,不会造成出血倾向,用药安全。