论文部分内容阅读
黄酮类物质是重要的植物次级代谢产物,广泛分布在食源性植物中,具有多种生物活性。本论文基于表面等离子共振（surface plasmon resonance,SPR）传感器,分别研究了三种柑橘黄酮（柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷）和α-淀粉酶、淀粉的实时相互作用,以及pH和盐浓度对其相互作用的影响;初步探讨了两者相互作用的构效关系,以及三种柑橘黄酮对淀粉老化的影响。主要研究内容和结果如下:（1）基于SPR传感器,以阿卡波糖和阿特拉津作为对比物,研究了三种柑橘黄酮与α-淀粉酶的实时相互作用,获得其实时动力学常数和平衡常数。同时利用SPR传感器,探究了对酶活有影响的外在因素（pH、NaCl和CaCl2）对三种柑橘黄酮与α-淀粉酶相互作用的影响。结果表明,阿卡波糖、柚皮苷,新橙皮苷、橙皮苷和阿特拉津都可以与α-淀粉酶结合,形成稳定的复合物,亲和力大小为阿卡波糖>柚皮苷>新橙皮苷>橙皮苷>阿特拉津,KD分别为0.78±0.12 mM、2.27±0.18 mM、3.09±0.20 mM、3.51±0.09mM和12.65±0.13 mM。这表明,三种柑橘黄酮与α-淀粉酶之间的相互作用与黄酮中羟基的数量和位置有关。此外,三种柑橘黄酮与α-淀粉酶的结合亲和力在pH 6时达到最高,并且0.2 M NaCl或0.1 M CaCl2使其亲和力明显增强。（2）利用碘显色法和双倒数曲线,分别研究了三种柑橘黄酮对α-淀粉酶活性的抑制作用,及其抑制类型;采用SPR和扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）研究了三种柑橘黄酮与淀粉的相互作用,以及这三种柑橘黄酮对淀粉老化的影响。结果表明,这三种柑橘黄酮对α-淀粉酶的活性有着不同程度的抑制作用,且随着三种柑橘黄酮浓度的增加,抑制率增强,抑制率的大小为柚皮苷>新橙皮苷>橙皮苷。三种柑橘黄酮对α-淀粉酶的抑制作用类型均属于非竞争性抑制。三种柑橘黄酮均能与淀粉结合,且柚皮苷与淀粉的结合能力最强,新橙皮苷次之,橙皮苷最弱,亲和力大小分别为3.98±0.20 mM,4.92±0.15 mM和5.07±0.17 mM。说明了三种柑橘黄酮羟基位置的不同是影响其与淀粉结合的主要因素。另外,SEM结果表明,这三种柑橘黄酮能有效的延缓淀粉的老化。因此推断,这三种柑橘黄酮影响淀粉的消化,一方面是通过抑制α-淀粉酶的活性;另一方面是其能与淀粉发生结合。（3）采用DPPH自由基清除法和超氧阴离子清除法,评价了三种柑橘黄酮与α-淀粉酶、淀粉相互作用后,其抗氧化活性的变化情况。结果表明,α-淀粉酶、淀粉对这三种柑橘黄酮清除DPPH自由基和超氧阴离子有不同程度的抑制作用,抑制作用的大小顺序为柚皮苷>新橙皮苷>橙皮苷,α-淀粉酶、淀粉对三种柑橘黄酮清除DPPH自由基的抑制率分别为31.10%、23.12%、22.07%、17.13%、9.7%、10.53%;对三种柑橘黄酮超氧阴离子的抑制率分别为25.41%、18.57%、18.24%、13.08%、5.20%、5.67%。该顺序与三种柑橘黄酮与α-淀粉酶、淀粉的结合亲和力的顺序一致,这说明,α-淀粉酶、淀粉与这三种柑橘黄酮的结合,影响了其清除自由基的能力。