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目的:子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)是原发于子宫内膜的上皮性恶性肿瘤,为妇科三大恶性肿瘤之一,占女性生殖道恶性肿瘤的20%-30%。近年来,子宫内膜癌的发病率不断上升,且有年轻化趋势。尽管多年来对子宫内膜癌开展了大量的研究,目前对于子宫内膜癌的确切病因仍不太清楚。因此,探索子宫内膜癌的发病机制,攻克这一疾病是目前亟待解决的问题。microCRNA(简写为miRNA,miR)是一类由大约19-25个核苷酸组成的非编码小分子RNA,能够通过碱基互补配对的方式,与特异的靶mRNA的3'UTR或编码区域结合,进而抑制靶mRNA的翻译或直接降解mRNA,最终抑制基因的表达。早在1993年,Lee等在秀丽隐杆线虫体内发现了第一个miRNA——lin-4,2000年又发现了第二个miRNA——let-7,从此掀起了miRNA研究的热潮。研究发现miRNA在细胞的生长发育、分化、增殖、凋亡以及肿瘤的发生发展等过程中都发挥着重要作用。不同的miRNA对细胞生长具有不同的调控作用,相同的miRNA对不同细胞株的调控作用亦不同。而且miRNA可调节众多癌基因和抑癌基因,在肿瘤中miRNA表达异常上调或下调。近来,作为众多miRNA基因组中一员的miR-200家族,在肿瘤学上的作用越来越受到重视。miR-200家族主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、 miR-141和miR-429五个成员。根据编码miRNA-200家族的基因定位可分为:miR-200a/miR-200b/miR-429和miR-200c/miR-141两组,在人类,miR-200a/miR-200b/miR-429编码基因位于1号染色体p36.33,而miR-200c/miR-141编码基因位于12号染色体p13.31。在研究miRNA的过程中,wu等利用基因芯片检测10组子宫内膜组织,与对照组相比子宫内膜癌组织中17个miRNAs表达上调,6个miRNAs表达下调,其中miR-429表达上调。梁静等利用基因芯片研究子宫内膜样腺癌组织中miRNA差异表达谱时,也发现miR-429的表达明显上调。最近国外也有人检测到miR-200家族在子宫内膜癌组织中高表达,且在子宫内膜癌细胞中应用anti-miR-200家族后发现anti-miR-429能显著抑制Ishikawa细胞的生长。研究还发现miRNA与P53关系密切,与P53在多种肿瘤的发生过程中形成复杂的调控网络。P53是目前肿瘤界研究最多最深入的抑癌基因之一,定位于17号染色体短臂17p13.1,该基因具有调节转录、抑制细胞生长、诱导凋亡的作用,而它的突变和缺失是导致许多肿瘤发生的原因。研究表明P53与子宫内膜癌的临床分级、病理分型、肌层浸润深度、淋巴结转移密切相关,且有文献报道P53与术后血清CA125的水平相一致,两者结合可以作为判断预后、指导临床治疗的指标之一。本实验旨在通过在子宫内膜癌Ishikawa细胞中转染miRNA-429的反义寡核苷酸(AS-miR-429)抑制miRNA-429的表达,观察miRNA-429被抑制后子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖与凋亡情况,并研究子宫内膜癌细胞中miRNA-429与P53之间是否存在表达作用关系,探讨miRNA-429在子宫内膜癌发生发展过程中的作用机制,从而为子宫内膜癌的临床诊断及治疗提供新的理论依据。方法:1.用含10%FBS胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养子宫内膜癌Ishikawa细胞。2.待细胞90%融合时转染,将实验分四组:空白对照组(即不转染组)、阴性对照组(即转染无关序列miR-429抑制剂组)、实验组(即转染特异性miR-429抑制剂组)、转染试剂组(即只加入转染试剂组)。3.用CCK-8检测转染后细胞的增殖活性变化。4.用Annexin-V-FITC/PI双染法检测转染后细胞的凋亡情况。5.用实时定量RT-PCR检测miR-429和P53的相对表达量。6.用Western blot检测P53的蛋白表达。7.采用SPSS13.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:相比空白对照组和转染试剂组,实验组和阴性对照组细胞的生长都受到明显抑制(阴性对照组细胞增殖活性低于实验组);实验组的细胞凋亡明显增多,凋亡率为(28.45±2.62)高于空白对照组(3.34±1.02)和转染试剂组(4.19±1.13),但低于阴性对照组(41.23±3.62),与各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。实时定量检测结果显示在子宫内膜癌Ishikawa细胞中有miR-429的表达,实验组及阴性对照组中miR-429的表达量明显低于空白对照组和转染试剂组,相应两组中P53mRNA的表达量也有所下降;Western blot检测结果显示实验组P53蛋白的表达有所上调,但与空白对照组和转染试剂组相比差异不显著(P>0.05),而阴性对照组P53蛋白的表达下调。结论:在子宫内膜癌Ishikawa细胞中有miR-429的表达,在子宫内膜癌Ishikawa细胞中加入AS-miRNA-429虽然可以抑制P53mRNA的表达、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,但不具有特异性。因此miR-429在子宫内膜癌发生发展中的作用及其与P53表达的相关性有待进一步探讨。