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BADH(甜菜碱醛脱氢酶)是合成甜菜碱的关键酶,BADH基因受盐诱导表达。本实验室的前期工作发现辽宁碱蓬(Suaeda liaolungensis K.)BADH启动子-300～+62 bp区段具有启动子活性,是一个强的盐诱导表达启动子。本研究通过生物信息学分析找出BADH启动子中的盐诱导功能元件,通过凝胶阻滞分析对BADH启动子中的盐诱导功能元件进行鉴定,通过酵母单杂交实验,分离与BADH启动子中的盐诱导功能元件相互作用的转录因子。本研究旨在寻找该区段启动子中盐诱导功能元件及与其相互作用的转录因子,为盐诱导启动子功能元件及转录因子研究提供可靠的参考和依据。具体工作及结果如下:
1、利用Genomatix软件,对BADH启动子-300～+62 bp区段进行生物信息学分析,得到约200个具有不同功能的元件,从中挑选7个可能的抗盐功能元件:PBl(GT-1元件)、PB2(MYB元件)、PB3(NAC元件)、PB4(WRKY元件)、PB5(MYB元件)、PB6(MYB元件)、PB7(G-box／MYC／ABA元件)。
2、分别以这7个元件为核心序列设计探针,与辽宁碱蓬叶片核蛋白结合,进行凝胶阻滞分析,发现有5条探针具有阻滞信号,初步认为PBl(GT-1元件)、PB2(MYB元件)、PB3(NAC元件)、PB6(MYB元件)、PB7(G-box／MYC／ABA元件)是BADH启动子中的盐诱导功能元件。
3、从所获得的5个盐诱导功能元件中选取PB3(NAC元件)作为诱饵,将该元件的4串联体构建到酵母菌株中,合成辽宁碱蓬叶片cDNA,经酵母单杂交实验,筛选出阳性克隆,经测序获得了6条序列,序列比对分析发现,其中两条序列是干旱及冷诱导相关基因,可能是与PB3相互作用的转录因子。