辣椒CaRH36基因的分离与功能初步分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yongheng0106
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辣椒是我国一种经济效益较高的重要蔬菜,也是土传病害较多,易发病的典型茄科植物,同时也受其它不同的非生物逆境胁迫影响。揭示辣椒抗病及抗逆分子机制,有利于培育和推广应用抗病或抗逆品种,提高辣椒生产效益。前人的研究发现DEAD-boxRNA解旋酶在植物RNA代谢及各种生.物胁迫和非生物胁迫应答中起到重要的调节作用,但其在辣椒中的作用则还未见到报道。本项研究从辣椒中分离出来了一种基因DEAD-box RNA解旋酶基因CaRH36,对其结构、表达及其功能进行了初步研究,主要结果如下:1、采用与拟南芥DEAD-box RNA解旋酶同源EST设计并合成特异性引物,利用该对引物通过基于PCR的cDNA文库筛选方法从辣椒cDNA文库中分离获得一个DEAD-box RNA解旋酶基因影响克隆,它的长度为1815bp,含有一个编码493个氨基酸残基的完整开放读码框。其推导的氨基酸序列中含有10个保守域,与拟南芥中DEAD-box RNA解旋酶家族中的AtRH36和苜蓿中的MtRH分别有65%,68%的序列同源性。推测所获得的候选基因是DEAD-box RNA解旋酶家族成员,命名为CaRH36。2、生物信息学预测发现CaRH36可能同时定位在内质网膜上和细胞核内,荧光定量PCR分析发现,该基因的表达在高温、低温、机械损伤和青枯病病原菌接种处理下下调;在辣椒根,茎,叶、花和果中该基因都有不同程度的组成型表达,暗示该基因在辣椒的生长发育中起一定的作用。3、构建了CaRH3 超表达载体,利用农杆菌介导的烟草叶盘法转化烟草,获得转基因植株34个独立的转基因克隆及其相应的T1代株系的种子。选取外源基因稳定表达且表型与野生型植株无明显差异的T1代株系的植株,研究发现CaRH36超表达可显著提高烟草对高温的耐性,在45℃高温胁迫下转基因植株表现出较对照更轻的伤害和较小的电导率。综上所述,本研究所分离的CaRH36在辣椒等茄科植物抗高温反应中充当正调控因子。
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