论文部分内容阅读
目的:模拟正常人饮酒的习惯,对SD大鼠进行灌胃,探讨在设定的剂量及时长内,摄入某品牌54°食用白酒,对大鼠肝细胞光镜下细胞形态、超微结构、凋亡指数、凋亡因子(Bcl-2、Bax、TNF-α、Caspase-9、Caspase-12)及金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达的影响,为人群健康饮酒提供基础实验依据。方法:(1)饮酒动物模型建立:115只正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CG,n=25)及实验组(EG,n=90);实验组分为低剂量组0.8ml·kg-1·d-1(LG)、中剂量组1.6ml·kg-1·d-1(MG)、高剂量组2.4 ml·kg-1·d-1(HG)。实验组大鼠每日11AM及5PM各灌胃一次,正常组不予处理,分别于第4周、8周、12周、16周、20周末,取肝脏组织;(2)HE染色技术观察实验各组及正常对照组肝脏组织结构及光镜下细胞形态;(3)透射电镜技术观察4周、8周、12周实验各组及正常对照组肝细胞超微结构;(4)TUNEL法检测各组大鼠肝细胞凋亡指数;(5)免疫组化SABC法、图像分析、形态计量法及免疫蛋白印迹检测各组大鼠肝细胞Bcl-2、Bax表达;(6)免疫组化SABC法、图像分析、形态计量法检测各组大鼠肝细胞Caspase-9、Caspase-12表达;(7)免疫组化SABC法、图像分析、形态计量法检测各组大鼠肝细胞TNF-α表达;(8)免疫组化SABC法、图像分析、形态计量法及免疫蛋白印迹检测各组大鼠肝细胞MT表达;(9)SPSS 23.0对实验数据进行统计及分析,统计方法为单因素方差分析(One-Way ANOVA)。结果:(1)HE染色技术显示实验各组和正常对照组肝脏组织结构及光镜下细胞形态未见明显病理改变;(2)透射电镜技术显示4周、8周、12周实验各组的各剂量组及正常对照组肝细胞超微结构未见明显病理改变。(3)TUNEL法检测肝细胞凋亡结果显示凋亡阳性细胞核呈棕黄色,实验各组大鼠肝组织细胞凋亡指数较正常对照组未见明显差异,(P>0.05);(4)Bcl-2、Bax免疫组化阳性产物存在于正常对照组及实验各组肝细胞胞质内,实验各组的各剂量组Bcl-2、Bax平均光密度值较正常对照组未见明显差异(P>0.05),免疫蛋白印迹显示实验各组的各剂量组Bcl-2、Bax表达水平比较正常对照组未见明显差异(P>0.05)。(5)Caspase-9免疫组化阳性产物存在于正常对照组及实验各组肝细胞胞质及胞核内,Caspase-12免疫组化阳性产物存在于正常对照组及实验各组肝细胞胞质内,除Caspase-12的4周MG、12周HG及20周HG稍有增加外(P<0.05),实验各组的各剂量组Caspase-9、Caspase-12平均光密度值较正常对照组未见明显差异(P>0.05);(6)TNF-α免疫组化阳性产物存在于正常对照组及实验各组肝细胞胞质内,实验各组的各剂量组TNF-α平均光密度值较正常对照组未见明显差异(P>0.05);(7)MT免疫组化阳性产物存在于正常对照组及实验各组肝细胞胞质内,实验各组的各剂量组MT平均光密度值较正常对照组未见明显差异(P>0.05),免疫蛋白印迹显示实验各组的各剂量组MT表达水平比较正常对照组未见明显差异(P>0.05)。结论:在本实验设定的剂量和时程内,用某54°食用白酒灌胃,大鼠肝脏组织结构、肝细胞形态及超微结构未见明显病理改变;对大鼠肝细胞凋亡指数、凋亡因子(Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-12、TNF-α)及MT的表达未见明显的影响。