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基因治疗的成功有赖于高效、安全和靶向的载体系统,将目标DNA转移至靶细胞核内进行表达。磁性纳米颗粒可在外加磁场的作用下,将DNA快速牵引至细胞表面,这种“磁转染”(magnetofection)技术已成为非病毒基因载体中一个新的发展分支。磷酸钙是一种传统的基因转染材料,转染效率较低但是生物相容性好,如何改进使其克服可控性差的缺点是载体研究者的目标。此外,阳离子聚合物载体在基因转染中的应用正日益广泛,但是关于其构效关系的研究还未深入。为此,我们制备了一系列不同表面电荷修饰的磁性纳米颗粒、形态可控的纳米磷酸钙及其与磁颗粒的复合材料、不同支化度的聚酰胺大分子,用于基因的可控传递和表达。完成的工作包括以下几个方面:
(1)分别制备了聚乙烯亚胺(PEI)、羧甲基葡聚糖、柠檬酸、氨基硅烷、甜菜碱修饰的四氧化三铁纳米颗粒,将这些磁性纳米颗粒、PEI和DNA复合在一起用于基因转染。结果表明,以上各种表面修饰的磁性纳米颗粒,只要磁颗粒表面有足够的电荷,都能使DNA快速富集到细胞的表面,起到增强转染的作用。
(2)制备了磷酸钙纳米球、羟基磷灰石纳米棒以及磷酸钙—四氧化三铁复合纳米材料,能通过钙离子的调节,高效地载带DNA并将其转移进细胞内表达,效果明显优于传统的磷酸钙共沉淀转染载体。
(3)合成了一系列不同支化度的聚酰胺大分子(PMA),能与DNA通过静电复合。改变PMA的支化度,会显著地影响其与DNA复合的能力、细胞毒性以及转染效率。支化度最大的PMA其转染效率与PEI相当。