论文部分内容阅读
目的观察非小细胞肺癌患者外周血中CD14+HLA-DR-/low细胞频率、绝对值、表型及功能特点。同时探讨NSCLC患者外周血中CD14+HLA-DR-/low细胞变化与肿瘤远处转移、化疗疗效及无疾病进展生存之间的关系。试图建立预测NSCLC化疗疗效的细胞学指标,并为临床制定化疗联合免疫治疗方案提供实验依据。方法采集健康对照35例,非小细胞肺癌89例的外周血,流式细胞仪检测外周血CD14+HLA-DR-/low细胞频率和绝对值,并分析其常见表面分子的表达情况,并根据临床分期和病理类型对各组间进行比较。用CFSE及细胞内因子染色方法检测NSCLC患者外周血CD14+HLA-DR-/low细胞对CD4+与CD8+T细胞的抑制作用。应用Real-time PCR技术和DCFH-DA荧光探针筛选可能的抑制功能相关分子,并通过相关阻断剂实验明确CD14+HLA-DR-/low细胞抑制机制。并利用CD14+HLA-DR-/low细胞变化特点,分析它们与化疗近期疗效的关系。多组实验结果间用Kruskal-Wallis H检验,对两组独立数据间进行Mann-Whitney U检验,对于配对数据之间的检测使用Wilcoxon matched-pairs t检验。对于数据之间的相关性分析使用Spearman rank相关性检验。患者生存曲线的绘制采用Kaplan-Meier方法,不同组之间的比较采用Log-rank检验。结果1.用流式细胞仪检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CD14+HLA-DR-/low细胞频率和计数相对于健康对照均明显升高;2. NSCLC患者CD14+HLA-DR-/low细胞与肺癌的远处转移及化疗近期疗效密切相关;3.相对于经典的CD14+HLA-DR+细胞,NSCLC患者CD14+HLA-DR-/low细胞仍具有部分单核细胞系的表型特征,但低表达CD16与CD86分子,并丧失同种异基因刺激能力;4.NSCLC患者CD14+HLA-DR-/low细胞能够抑制CD4+与CD8+T细胞的激活增殖及分泌细胞因子IFN-γ的能力,且发挥抑制作用需要与靶细胞近距离接触;5.NSCLC患者CD14+HLA-DR-/low细胞高表达NADPH氧化酶亚基gp91phox和ROS,通过抑制ROS能够有效恢复CD4+与CD8+T细胞的功能。结论NSCLC患者外周血CD14+HLA-DR-/low细胞通过产生ROS来抑制机体的免疫系统,调节针对肿瘤的免疫反应,可能参与非小细胞肺癌疾病进展过程中,并与进展期NSCLC患者化疗近期疗效相关。通过我们对CD14+HLA-DR-/low细胞的研究,可能为晚期NSCLC的免疫治疗提供新的实验室依据。