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目的:建立实时定量RT-PCR法检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARa mRNA的方法;探讨APLPML-RARa融合基因表达水平与疗效的关系。 方法:RT-PCR扩增培养的NB4细胞PML-RARa融合基因,用提取的1μgNB4细胞的总cDNA进行10倍的梯度稀释,构建标准品,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定。定量检测4例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后骨髓内PML-RARa转录本水平和对1例经治疗完全缓解后又复发的患者PML-RARa转录本水平进行动态监测。 结果:建立的实时定量RT-PCR方法,可检测出10-5μgNB4细胞cDNA中的PML-RARa融合基因重复性的CT值,管间、批间变异系数(CV)分别为2.1%、3.8%。4例患者初治骨髓PML-RARa基因转录本水平的拷贝数分别为1884、5533、1803、4677,平均拷贝数为3475。经ATRA+化疗治疗后再次检测其PML-RARa基因转录水平拷贝数下降至40、135、79、229,平均拷贝数为121。还有1例患者初治时基因转录本水平为8600,经过4个月治疗,虽然此时患者处于完全缓解期,但其转录水平拷贝数仍有730。3个月后患者出现复发,转录本水平升至为11000拷贝数。经过ATRA+化疗治疗后转录本水平又逐渐下降至1200。 结论:建立的实时定量RT-PCR灵敏、重复性好。治疗后PML-RARa融合基因转录本水平明显下降,复发时基因转录本水平又升高。其融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致,有助于监测白血病微小残留病,评价疗效及判断预后。