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鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)感染引起鸭的一种以发育缓慢、产蛋量骤降和瘫痪等为特征的传染病。DTMUV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群,它不但可以感染鸭,而且还可以感染鸡、鹅等禽类,对包括人类在内的哺乳动物具有潜在的健康威胁。血红素加氧酶(HO)是细胞的一种催化血红素降解的起始酶和非常重要的限速酶,血红素加氧酶1(HO-1)是HO的一种亚型,它是在机体内正常存在的一种重要的内源性保护蛋白,其活性不仅与机体的抗炎、抗氧化、抗凋亡等功能密切相关,而且在病毒的感染及复制过程中发挥着非常重要的调控作用,但是对不同病毒调控作用不尽相同。DTMUV感染能否影响细胞中HO-1的表达以及HO-1在DTMUV感染细胞的过程中发挥什么作用尚不清楚。因此本研究拟通过试验明确DTMUV感染对宿主细胞HO-1表达的影响及HO-1在DTMUV感染细胞过程中的作用及其作用机制,从而为该病的防治提供理论依据。DTMUV感染对细胞HO-1基因表达的影响。以实验室保存DTMUV毒株接种鸭胚成纤维细胞(DEF细胞),同时设未接毒对照组,分别收集感染不同时间段的接毒细胞和对照组细胞,提取各组样品的总RNA进行反转录,以荧光定量PCR方法检测细胞HO-1的表达量。试验结果表明,随着DTMUV感染时间的延长,细胞内HO-1的表达量先短暂升高,随后迅速下降到较低水平,表明DTMUV的感染可以抑制细胞内HO-1基因的表达。上调HO-1的表达对DTMUV在DEF细胞上感染的影响。为探索HO-1在DTMUV感染过程中的作用,本试验使用HO-1的特异性诱导剂——钴原卟啉(CoPP)及构建特异性表达质粒诱导细胞HO-1基因的表达,以检测其对DTMUV感染的影响。结果表明,特异性质粒和CoPP均可以显著上调HO-1基因和蛋白的表达水平而不影响细胞的活性,HO-1的基因表达量与特异性质粒转染含量及CoPP浓度均呈正相关,而DTMUV基因表达水平与其呈负相关,转染HO-1过表达质粒后,细胞内病毒的增殖受到了显著抑制。试验中使用最适浓度的特异性质粒及CoPP处理细胞可使细胞中HO-1的表达量显著上调,随着感染时间的延长,细胞中DTMUV的E基因表达量逐渐降低,表明上调HO-1的表达可以有效抑制DTMUV的感染。下调HO-1的表达对DTMUV感染的影响。为明确HO-1的作用我们利用si RNA特异性沉默HO-1基因以降低HO-1的表达量,然后检测HO-1基因沉默后的细胞中E基因的表达情况。结果表明,转染si RNA的细胞HO-1的基因表达量明显降低,而细胞中E基因表达量明显升高,随着si RNA浓度的升高,HO-1蛋白的表达量逐渐减少,细胞中病毒的含量显著增多,从而说明特异性降低HO-1的表达量可以促进DTMUV在细胞上的增殖。HO-1抑制DTMUV感染的作用机制研究。为了弄清HO-1抑制DTMUV感染的机理,我们在DTMUV感染细胞前、后分别用CoPP处理细胞,结果表明,无论感染前还是感染后处理细胞,均能抑制DTMUV的感染,且结果无显著差异。用biliverdin、CORM及Fe Cl3溶液分别模拟HO-1的三种催化产物biliverdin、CO和Fe2+处理细胞发现,只有用Fe Cl3处理的细胞HO-1的m RNA表达水平明显升高且病毒E基因表达量明显降低,从而说明CoPP促进细胞抑制DTMUV感染的作用与病毒感染的时期无关,在此过程中细胞对病毒感染的抑制作用是由HO-1的催化产物Fe2+介导的。