恶疫霉有性杂交后代的生物学与适生性研究

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本文对同宗配合疫霉菌—恶疫霉(Phytophthora cactorum)有性杂交后代的生物学、适生性及有性杂交所引起的变异进行了较系统的研究。1、恶疫霉有性杂交后代的生物学研究 将抗甲霜灵(细胞核基因控制)和抗地茂散(细胞质基因控制)稳定遗传的两株恶疫霉突变株(AP14M-1-52和PK9Cn-2-24)作为亲本进行配对,培养36天后诱导其卵孢子萌发,从3760个单卵孢株中,获得50株带有双亲标记的杂交个体。对其中32株杂交个体的生长速率、有性和无性繁殖能力、卵孢子和游动孢子萌发率、致病力及对高温的耐受力等生物学性状进行测定。结果显示,测试的32株杂交个体在LBA培养基上均能较好地生长,有24株的杂交个体的生长速率介于两亲本之间;在LBA和SL培养基上,大多数杂交个体均能产生较大数量的卵孢子,有37%的杂交个体在SL培养基上产卵孢子能力显著大于双亲,仅有一个杂交个体不产生卵孢子;在人工培养条件下,大多数供试杂交个体可以产生较大数量的孢子囊,其中15株杂交个体产孢子囊能力处于双亲之间;被测的杂交个体产生的卵孢子或游动孢子均可以萌发形成有效的单孢株,有22株的杂交个体的卵孢子萌发率大于50%;被测的杂交个体接种在苹果上都有较强的致病力,有16株杂交个体的致病力显著大于双亲。表明在群体水平上恶疫霉有性杂交后代具有较强的生活能力,提示同宗配合恶疫霉不同菌株间的有性重组,对该种的群体遗传多样性可能具重要作用。2、恶疫霉自交和杂交后代引起的变异比较 本文对恶疫霉抗甲霜灵突变株(核基因控制)和抗地茂散突变株(胞质基因控制)的游动孢子后代以及突变株自交和杂交产生的卵孢后代的生长速率、产孢能力和致病力等生物学性状进行研究。结果表明,配对亲本(突变株)的游动孢子后代生物学性状相对一致,而来自其自交和杂交的卵孢子后代性状变异较大。在致病力方面,两组配对亲本杂交后代的变异大于自交后代的变异;在卵孢子产生能力和生长速度方面,第一配对亲本AP14M-1-52和PK9Cn-2-24杂交后代的变异大于自交后代的变异,但另一配对亲本AP14M-1-53和PC4Cn-3-36杂交后代的变异则介于两亲本自交后代的变异之间;在孢子囊产生能力方面,两组配对亲本中均有一个亲本自交后代变异大于杂交后代的变异。结果也显示,恶疫霉突变株自交和杂交后代的变异与供试菌株和所测定的性状有很大关系,并提示操纵这两种后代变异的一。机制可能不同。结果还表明,控制快速生长一高产抱子囊能力和强致病力的等位基因相对控制慢的生长速率、低产抱子羹能力和弱致病力的等位基因呈显性;对配对亲本和杂交后代的卵抱子产量的结果进行分析,表明杂交后代的卵抱子产生能力在一个配对组合中表现出基因的累加效果,而在另一组合中,表现出杂种优势。这提示恶疫霉有性杂交对其遗传多样性的产生具有重要作用。3、恶疫霉有性杂交后代与野生型亲本的竟争能力5株杂交个体(携带对甲霜灵和地茂敬的抗性标记)的游动抱子分别与其野生型亲本(AP14和叫,对甲霜灵和地茂散均敏感)按 1:l、1:9和 1:49比例混合涂布在 10%V。培养基平板上或接种在苹果片上生长4~sd,并诱导产生抱子羹和释放游动泡子,经单抱分离建立单抱无性系,在含甲霜灵或地茂散的培养基上检测杂交个体的单抱后代所占的百分率。结果是,在V。培养基平板上混台生长的30个组合中,仅3个组合杂交个体的单抱后代在其单泡无性系群体中所占的比例显著低于野生型亲本,其余组合均符合其各自的期望值;在苹果片上混合接种的30个组 fi合,杂交个体与野生型亲本的单抱后代所占比例均符合其各自的用望值。进一步测定2个杂交个体(APK—9和APK—24)分别与其野生型亲本以1:l的比例混合后在人培养基平板上和苹果片上连续3个产抱循环过程中两者比例的变化,结果是,在杂交个体与野生型亲本AP14 的组合中,杂交个体的后代所占的百分率出第一个产抱循环的 49.1%~54.2%至第三个产抱循环下降为1.8%~6.2%;而在与另一野生型.亲本叫 的组合中,杂交个体的后代所占的百分率从第一个产抱循环的44.4%~54.2%至第3个产抱循环上升为72.l%~75.0%。上述结果表明恶疫霉有性杂交个体在离体和活体上均有较强的竟争能力,提示有性杂交对其生物多样性的产生可能具有重要作用。4、恶疫霉有性杂交后代在土坯中的腐生定殖能力 被测的6个杂交后代菌株的卵抱子经 128天越冬后,均有部分仍然存活,从土壤中回收的越冬卵抱子在实验室条件下的萌发率为1刀%~64刀%。杂交后代菌株在土壤中的苹果病组织块(10 X mm XI onun XI OInln)上经 4~5个月的越冬后进行分离,从灭菌土壤中 5个月后的检出率为 29.0%~100%,在未灭菌的自然土壤中 4个月后的
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