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背景 EB病毒在正常人群中普遍易感,在原发感染后,大多数无临床症状,尤其是6岁以下幼儿大多表现为隐性或轻型发病,但在青春期和青年期,约50%的原发性感染均表现为传染性单核细胞增多症(Infectious mononucleosis,IM),IM是EB病毒感染免疫细胞(主要是B淋巴细胞)导致免疫功能失调引起的疾病,严重者可继之感染T淋巴细胞、NK细胞发生EB病毒相关性噬血细胞综合症(EB virus correlates with haemophilus syndrome,EBV-HLH)而危及生命。免疫细胞表面表达多种免疫抑制因子,包括程序性死亡分子-1(Programmed death 1,PD-1)及程序性死亡分子-1配体(Programmed death 1 ligand,PD-L1)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen 4,CTLA-4)、含T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(T cell immunoreceptor with Ig and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory domains,TIGIT),它们通过与相应的配体结合从而抑制免疫细胞的增殖及活化,下调免疫反应从而达到免疫抑制的作用。由此可见,传染性单核细胞增多症与机体的细胞免疫抑制密切相关。目的 探索传染性单核细胞增多症PD-1/PD-L1、CTLA-4、TIGIT在不同细胞(包括B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)上的表达水平及意义。方法 以2017年4月至2017年9月湖南省儿童医院收治的59例传染性单核细胞增多症患者为研究对象(签署知情同意书),均于急性期抽血,其中34例患者于恢复期抽血;20例健康体检儿童为对照组(Normal control,NC)。采用流式细胞术分别检测PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在以上患者疾病不同阶段的不同细胞(包括B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)上的表达水平,观察在疾病不同阶段有无变化,及其表达量与肝功能损伤的比较,以及与EB病毒DNA含量、热程的相关性。结果 1.PD-1/PD-L1:(1)PD-1/PD-L1在IM患者与对照组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与对照组(0.7±0.8)%、(18.8±6.5)%、(35.7±25.1)%、(3.4±2.9)%比较,PD-1在IM急性期组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达升高,分别为(5.0±3.7)%、(40.3±11.5)%、(73.4±13.3)%、(9.3±12.8)%(均P<0.05),PD-1在IM恢复期组CD4~+T、CD8~+T细胞上表达升高,分别为(36.7±13.6)%、(59.9±22.0)%(均P<0.05),PD-1在B、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与IM恢复期(1.7±2.0)%、(36.7±13.6)%、(59.9±22.0)%、(6.2±6.0)%比较,PD-1在IM急性期组B、CD8~+T细胞上表达升高,分别为(5.0±3.7)%、(73.4±13.3)%(均P<0.05),PD-1在CD4~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与对照组(0.9±0.9)%、(0.4±0.7)%、(1.1±2.6)%、(1.1±1.1)%比较,PD-L1在IM急性期组B细胞上表达升高为(7.8±6.0)%(P<0.05),PD-L1在CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05),PD-L1在IM恢复期组B、NK细胞上表达升高,分别为(4.8±6.3)%、(6.4±13.7)%(均P<0.05),PD-L1在CD4~+T、CD8~+T上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。与IM恢复期(4.8±6.3)%、(2.0±8.3)%、(5.2±11.2)%、(6.4±13.7)%比较,PD-L1在IM急性期组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)PD-1/PD-L1在IM肝炎组与非肝炎组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与非肝炎组(4.3±2.5)%、(37.7±11.6)%、(69.5±9.7)%、(5.7±3.6)%比较,PD-1在肝炎组B、C D 4~+T、C D 8~+T、N K细胞上表达水平差异无统计学意义(t=0.976,P=0.333;t=1.303,P=0.198;t=1.732,P=0.089;t=1.587,P=0.118);与非肝炎组(7.5±6.2)%、(0.6±0.9)%、(3.2±4.1)%、(2.6±2.2)%比较,PD-L1在肝炎组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达水平差异无统计学意义(t=0.212,P=0.833;t=0.551,P=0.584;t=0.781,P=0.438;t=0.111,P=0.912)。(3)PD-1/PD-L1在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与EBV-DNA定量的相关性:PD-1在IM患者B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与EBV-DNA定量无明显相关性(r=0.049,P=0.723;r=-0.223,P=0.105;r=-0.223,P=0.119;r=-0.100,P=0.471);PD-L1在B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与EBV-DNA定量无明显相关性(r=0.068,P=0.625;r=-0.021,P=0.881;r=0.026,P=0.851;r=-0.068,P=0.623)。(4)PD-1/PD-L1在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与热程的相关性:PD-1在IM患者B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与热程无明显相关性(r=0.166,P=0.209;r=-0.071,P=0.594;r=0.048.P=0.718;r=0.031,P=0.816);PD-L1在B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与热程无明显相关性(r=-0.065,P=0.624;r=-0.102,P=0.444;r=0.065,P=0.624;r=0.133,P=0.316)。2.CTLA-4:(1)CTLA-4在IM患者与对照组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与对照组(0.5±0.5)%、(1.4±1.7)%、(1.2±1.8)%、(1.6±1.6)%比较,CTLA-4在IM急性期组B、CD4~+T细胞上表达升高,分别为(3.7±7.1)%、(6.9±10.3)%(均P<0.05),CTLA-4在CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05),CTLA-4在IM恢复期组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05);与IM恢复期(1.8±2.7)%、(5.2±6.2)%、(5.9±17.8)%、(7.3±12.4)%比较,CTLA-4在IM急性期组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)CTLA-4在IM肝炎组与非肝炎组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与非肝炎组(2.8±4.7)%、(5.6±9.7)%、(4.9±12.5)%、(5.6±8.3)%比较,CTLA-4在肝炎组B、C D 4~+T、C D 8~+T、N K细胞上表达水平差异无统计学意义(t=0.678,P=0.500;P=0.736,P=0.465;t=0.617,P=0.540;t=0.852,P=0.398)。(3)CTLA-4在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与EBV-DNA定量的相关性:CTLA-4在IM患者B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与EBV-DNA定量无明显相关性(r=0.662,P=0.659;r=-0.048,P=0.731;r=-0.036,P=0.798;r=-0.037,P=0.792)。(4)CTLA-4在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与热程的相关性:CTLA-4在IM患者B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与热程无明显相关性(r=-0.103,P=0.437;r=-0.148,P=0.265;r=0.047,P=0.726;r=-0.078,P=0.556)。3.TIGIT:(1)TIGIT在IM患者与对照组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与对照组(2.3±1.3)%、(13.6±7.0)%、(18.4±8.9)%、(57.4±10.8)%比较,TIGIT在IM急性期组B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上表达升高,分别为(9.8±6.9)%、(25.2±10.7)%、(43.7±14.6)%、(68.7±10.4)%(均P<0.05),TIGIT在IM恢复期组B、CD4~+T、CD8~+T细胞上表达升高,分别为(6.3±6.8)%、(28.4±19.3)%、(39.5±18.5)%(均P<0.05),TIGIT在NK表达差异无统计学意义(P>0.05);与IM恢复期(6.3±6.8)%、(28.4±19.3)%、(39.5±18.5)%、(63.3±14.8)%比较,TIGIT在IM急性期组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)TIGIT在IM肝炎组与非肝炎组外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平的比较:与非肝炎组(11.7±7.9)%、(23.7±11.5)%、(42.7±13.6)%、(67.4±11.2)%比较,TIGIT在IM肝炎组B、CD4~+T、CD8~+T、NK细胞上表达水平差异无统计学意义(t=-1.577,P=0.120;t=0.789,P=0.433;t=0.412,P=0.682;t=0.708,P=0.482)。(3)TIGIT在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与EBV-DNA定量的相关性:TIGIT在IM患者B细胞上表达水平与EBV-DNA定量呈正相关(r=0.371,P=0.006),TIGIT在CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与EBV-DNA定量无明显相关性(r=-0.040,P=0.775;r=0.044,P=0.754;r=-0.127,P=0.362)。(4)TIGIT在IM患者外周血不同细胞(B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞)表达水平与热程的相关性:TIGIT在IM患者B、CD4~+T、CD8~+T及NK细胞上的表达水平与热程无明显相关性(r=-0.010,P=0.938;r=0.002,P=0.988;r=0.017,P=0.900;r=-0.147,P=0.267)。结论 (1)传染性单核细胞增多症PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在疾病急性期表达上调,随着疾病恢复而表达下降,本研究推测其可能参与了传染性单核细胞增多症的发病机制;(2)TIGIT表达水平与EBV-DNA定量呈正相关;(3)PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT可能没有参与其肝功能损伤机制;其表达水平与热程无相关性。