黄癸素抑制肿瘤新生血管形成的研究

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目的:研究黄癸素对肿瘤新生血管生成的影响,以及对肿瘤血管新生相关蛋白表达的影响,并探讨黄癸素对小鼠Lewis肺癌血行转移抑制作用。方法:1.黄癸素对ECV304细胞的增殖、迁移和小管形成的影响:应用MTT法测定黄癸素对ECV304增殖影响;划痕法测定黄癸素对ECV304迁移能力的影响;二维培养观察黄癸素对ECV304细胞小管样结构形成的影响。2.黄癸素对小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)表达血管生成因子的影响:MTT法测定黄癸素对LLC细胞增殖的影响;Transwell小室共培养模型观察黄癸素对LLC细胞诱导ECV304迁移作用的影响;Westernblotting法观察黄癸素对LLC表达VEGF和MMP-9的影响。3.黄癸素对Lewis肺癌在小鼠体内肺转移的影响:C57BL/6小鼠腋下接种LLC细胞,次日开始60、90和120mg/kg灌胃给药,每日一次,共20天。每3d称一次体重,第9天开始,每3d测一次瘤体积,第22天处死小鼠,取瘤和双侧肺,称重,福尔马林固定:HE染色检测瘤细胞肺转移情况,采用CD34标记免疫组化法检测微血管密度MVD。结果1.黄癸素抑制ECV304细胞的增殖、迁移和小管形成:黄癸素对ECV304细胞的增殖抑制作用呈时间-效应和浓度-效应依赖性,黄癸素作用24、48、72h的IC50分别为:40.61、7.15和2.40mg/L;与阴性对照组比较,经黄癸素处理的ECV304细胞迁移数均明显减少,浓度为1.25、2.5、5mg/L时迁移抑制率分别为38.56%、53.11%和78.81%(P<0.01);与阴性对照组比较,经黄癸素处理的ECV304细胞小管数目均显著减少,且管腔不完整,浓度为20、30、40mg/L时小管形成抑制率分别为26.99%、39.26%和65.64%(P<0.05)。2.黄癸素抑制小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)血管生成因子的表达:黄癸素对LLC细胞增殖的抑制作用表现为时间-效应和浓度-效应依赖性关系,黄癸素作用24、48、72h的IC50分别为:8.87、2.26和0.98mg/L。黄癸素能抑制LLC细胞诱导的ECV304细胞迁移,阴性对照组和黄癸素浓度在2.5、5和10mg/L时内皮细胞迁移细胞数分别为283.3±14.2、178.7±26.6、130.5±14.6和104.0±12.5,抑制作用呈浓度依赖关系;20mg/L黄癸素能显著抑制LLC细胞表达VEGF因子,5、10、20mg/L黄癸素显著抑制MMP-9的表达,呈浓度依赖关系。3.黄癸素抑制Lewis肺癌在小鼠体内生长及形成新生血管:瘤平均体积随药物浓度的升高而逐渐减小,与阴性模型对照组比较,高剂量和中剂量给药组的瘤重、瘤内血管数的差异均具有显著性,肺转移瘤细胞减少。结论:在体外,黄癸素能够通过抑制血管内皮细胞ECV304增殖、迁移和小管样结结构的形成,直接抑制血管新生;也能够通过抑制LLC细胞表达VEGF和MMP-9因子,抑制瘤细胞诱导的血管新生。在体内,黄癸素能显著抑制小鼠Lewis肺癌的生长和转移,且毒副作用小,作用机制可能与减少瘤血管相关。
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