燕麦、青稞和荞麦抗血小板聚集肽的鉴定及作用的分子机制

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血栓栓塞引起的心血管疾病已成为人类生命健康的主要威胁之一。血小板聚集是血栓形成的关键,血小板聚集抑制剂的研究对于由血小板聚集引起的心血管疾病的防治具有重要意义。本文研究了燕麦、青稞和荞麦抗血小板聚集肽的鉴定和作用的分子机制,主要得到了如下结果。(1)我们通过蛋白分级提取方法提取燕麦、青稞和荞麦中的各组分蛋白,采用体外模拟消化水解、胰蛋白酶水解和碱性蛋白酶水解三种水解方式制备了多肽,研究了这些多肽的抗血小板聚集活性。结果表明:燕麦、青稞、荞麦及其各组分蛋白水解物均有较强的抗血小板聚集活性,IC50值从0.282 mg/ml(燕麦体外模拟肠胃消化水解物,6 h)到2.496 mg/ml(青稞谷蛋白胰蛋白酶水解物,14 h),且抑制作用呈浓度依赖型。(2)我们通过超滤将燕麦胰蛋白酶水解肽按照分子量不同分为大(MW>10kDa)、中(3kDa-10kDa)、小(MW<3kDa)三个组分,研究它们的抗血小板聚集活性;并利用nano-LC-ESI-MS/MS技术对抗血小板聚集活性最强的多肽组分进行了鉴定。结果表明,三种组分均有较好的抗血小板聚集活性,且小分子组分(MW<3kDa)的抗血小板聚集活性比大分子组分更强,达到73.11士0.95%;并在分子量小于3kDa的多肽组分中鉴定出38个氨基酸残基在7个以上的肽,大部分来自燕麦11S球蛋白和燕麦12S球蛋白2。(3)我们采用酶联免疫分析法检测燕麦抗血小板聚集肽(oat anti-platelet peptide, OAPP)对花生四烯酸(AA)代谢途径的影响;并以分子对接技术研究OAPP对环氧化酶-1(COX1)的影响。我们发现,OAPP通过介导AA代谢途径能够显著抑制AA代谢过程中COX1的活性(p<0.05),从而降低血栓烷-A2(TXA2)的生成量,最终抑制血小板聚集;其中,有9个肽可以与COX1的活性中心相结合,且结合能较低(-6.5至(?)-7.5 kcal/mol)它们是:ALPIDVLANAYR、EFLLAGNNKR、GEEFGAFTPK、 QLAQIPR、LQAFEPLR、ALPVDVLANAYR、GEEFDAFTPK、QKEFLLAGNNK和TNPNSMVSHIAGK。本文首次对杂粮的抗血小板聚集活性进行了报道,在燕麦中鉴定出了抗血小板聚集肽,并分析了其作用的分子机制。为杂粮的综合利用和抗血栓功能性食品的开发提供了理论依据。
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