论文部分内容阅读
目的:1.观察从肝论治病毒性角膜炎的临床效果;2.采用BALB/c小鼠模型,感染动物HSV-1标准株(F株),常规小鼠腹腔麻醉,角膜划痕法接种病毒,建立单纯病毒性角膜炎模型,并以此模型探讨从肝论治(清火柔肝方)的疗效及其作用机制。方法:1.从角膜疾病病因病机出发探讨治疗本病的方法,研究为前瞻性、随机分组、双盲模拟对照临床试验,选取本院2012年12月~2014年12月住院治疗的病毒性角膜炎患者,实验收入组109例,脱落21例,完成88例,采用中医辨证分为肝经风热型和肝阴不足型共计2型4组:A-肝经风热型(A1对照组、A2治疗组);B-肝阴不足型(B1对照组、B2治疗组)。对照组给予更昔洛韦滴眼液+中药安慰剂1或中药安慰剂2,治疗组给予更昔洛韦滴眼液+中药汤剂1或中药汤剂2,比较两组治疗效果、症状和体征消失时间及不良反应;2.制备清火柔肝方、无环鸟苷片含药血清,进行体外抗病毒实验;BLAB/C小鼠,水合氯醛腹腔注射麻醉下,显微镜下用5号手术刀片背面尖端于右眼角膜呈“#”字划痕,以穿透角膜上皮层为宜,再用吸管将5μL含或者不含2×106 PFU HSV-I病毒的DMEM培养基滴于右眼角膜表面,建立HSK动物模型。造模后每天用Genesis-D眼部照相机观察小鼠眼部发病情况,并进行角膜病变评分;分别于造模后7天处死并分离BLAB/C小鼠腹股沟淋巴结,提取单细胞悬液,并用Ficoll密度梯度离心法分离纯化T淋巴细胞,通过流式细胞仪检测各组抗原特异性T细胞中CD4+IFN-γ+及CD4+IL-17+的百分比变化;心脏采血0.5~0.6 m L,ELISA检测细胞因子IFN-γ、IL-17的表达。结果:1.治疗组(A2、B2)视物模糊、畏光流泪、沙涩疼痛、睫状充血和角膜浸润水肿的消失时间均快于对照组(A1、B1),两组比较,差异均有显著性意义(P﹤0.05);治疗组(A2、B2)与对照组(A1、B1)治愈率及复发率比较,差异均有显著性意义(P﹤0.05);2.清火柔肝方含药血清对Vero细胞的增殖无显著影响,且对Vero细胞毒性较低;清火柔肝方治疗组与病毒模型组比较,Balb/c小鼠角膜病变范围明显缩小,浸润点减少,差异有统计学意义(P<0.01),清火柔肝方治疗组至第14天,Balb/c小鼠眼角膜病变基本治愈,平均治愈时间14.66天;各组小鼠淋巴结中抗原特异性T细胞CD4+IFN-γ+,CD4+IL-17+的百分比(%),差异具有统计学意义(P﹤0.01);清火柔肝方治疗组、ACV组小鼠T细胞分泌的细胞因子(IFN-γ、IL-17)的表达与模型组小鼠对照,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.从肝论治病毒性角膜炎的临床效果明显,能显著提高治愈率、降低复发率,值得临床推广应用;2.中药对HSK的病原体HSV-I有明显的抑制作用。通过中药复方清火柔肝方对实验性HSK动物疗效观察、体外含药血清离体抗病毒和体外细胞基础培养抗病毒等相关实验研究,为中药治疗病毒性角膜炎提供了客观依据。中药制剂抗病毒机制一方面可能与直接灭活病毒或诱生干扰素,减少或阻断病毒m RNA的翻译有关;另一方面调整免疫系统,而后者显得更为重要。