全反式维甲酸在肝缺血再灌注损伤中的作用机制研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:kahn419
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背景:肝脏缺血再灌注(ischemia-reperfusion, IR)损伤是临床工作中常会遇见的问题,并且,随着国家取消尸肝供体移植,心死亡后器官捐献的(Donation after circulation death, DCD)肝脏已经成为当今肝移植的主要来源,而DCD供肝的缺血再灌注损伤程度将会明显影响移植肝的功能恢复,甚至会决定肝移植手术的成败,因此如何有效地减轻肝脏IR损伤程度将是DCD供肝肝移植手术成功的关键。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)是临床上用来治疗急性早幼粒白血病的常用药,现在研究发现ATRA也具有减轻肝IR损伤,但是其具体作用机制还不清楚,本实验旨在阐释ATRA在肝IR损伤中的作用机制。方法:体内实验:采用70%肝IR损伤模型,分为空白组,IR组和ATRA预处理组,在相应时间点,采血后处死小鼠并取材,进行肝功能检测,观察肝脏病理并评分,并利用RT-PCR和蛋白印记等技术对相应指标进行检测;体外实验:采用过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2)和脂多糖(1ipopolysaccharides, LPS)分别处理小鼠肝细胞FL83B和巨噬细胞RAW264.7,分组情况均为DMSO、 H2O2/LPS、ATRA预处理和LE540预处理组,在相应时间点,收集细胞后,再利用RT-PCR和蛋白印记等技术进行分析。结果:(1)IR组中,肝功能、肝脏组织病理评分均高于空白组且有统计学差异;(2) ATRA预处理组中,肝功能及肝脏组织病理评分均低于IR组,炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA等水平也有明显下降;(3)ATRA预处理组中,维甲酸受体α、Bcl-2、p-Akt、Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ等蛋白水平均高于IR组,cleaved-caspase 3、 Foxol、 TLR4、NF-κB p65和p62等蛋白水平低于IR组;(4)在FL83B试验中,ATRA预处理后使细胞凋亡减少,维甲酸受体α、Bc1-2、p-Akt、 Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ等蛋白水平均高于H202组,cleaved-caspase 3、Foxo1、p62等蛋白水平低于H202组,而LE540预处理后损伤明显加重;(5)在RAW264.7试验中,ATRA预处理组中,炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA等水平明显下降,维甲酸受体a、p-Akt、Beclinl和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ等蛋白水平均高于LPS组,Foxo1、TLR4、NF-κB p65和p62等蛋白水平低于LPS组,而LE540预处理后,却进一步加重了炎症反应。结论:(1)70%肝IR损伤模型建立成功;(2) ATRA可以减轻肝脏R损伤:①减少细胞凋亡,②调节先天免疫反应;(3) ATRA的保护作用可能与激活维甲酸受体α有关。
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