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实验目的阿尔茨海默病（Alzheimer s disease,AD）是好发于老年人的中枢神经系统退行性疾病,痴呆的最常见类型。磷脂转运蛋白（phospholipid transfer protein,PLTP）是广泛分布于中枢神经系统的糖蛋白,近年研究发现PLTP与AD密切相关。AD患者脑组织中PLTP活性显著下降,敲除PLTP基因能促进AD发生。FAD依赖氧化还原酶结构域包含蛋白（FAD dependent oxidoreductase domain containing 2,FOXRED2）为内质网相关降解（ER-associated degradation system,ERAD）蛋白。β-淀粉样蛋白（beta amyloid,Aβ）可上调FOXRED2基因,进而抑制蛋白酶体活性、促进内质网应激、诱导AD发生。研究发现,PLTP转基因小鼠可明显下调FOXRED2基因。那么PLTP过表达是否通过调控FOXRED2基因而对AD发挥保护作用?目前国内外还鲜有报道。本课题利用PLTP转基因小鼠,以Aβ诱导AD模型,观察PLTP过表达对AD的保护作用,并对其机制进行初步探讨。实验方法1、实验分组与模型的制备（1）动物繁殖及鉴定:8周龄的雄性PLTP转基因小鼠（简称PLTP-Tg小鼠）与雌性C57BL/6小鼠（简称WT小鼠）合笼繁殖（雄雌比例:1:23）,获得的G2代小鼠进行基因型鉴定和表型鉴定。选择68周龄PLTP-Tg小鼠及同窝出生WT小鼠进行实验。（2）实验分组及AD模型制备:麻醉小鼠,立体定位仪定位侧脑室,微量注射器注射Aβ2535（0.6mg/kg）,注射剂量为4μl,速度为1μl/min,缓慢注入后留针20min,术后小鼠放于37±0.5℃的恒温器上保持体温。对照组注射等体积生理盐水（NS）。小鼠分组及给药如下,WT小鼠随机分为空白对照组（侧脑室注射NS）、模型组(侧脑室注射Aβ2535)、PLTP-Tg小鼠组(侧脑室注射Aβ2535),观察PLTP过表达对AD保护作用。2、Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,包括定位航行实验和空间探索实验。3、酶标仪检测水迷宫实验后,处死小鼠,分离皮质及海马,制备组织匀浆,Elisa试剂盒检测各组小鼠皮质和海马Aβ140和Aβ142含量,荧光法检测各组20S蛋白酶体的活性。4、病理学检查小鼠脑组织固定,石蜡包埋,切片,硫黄素S染色老年斑。5、蛋白免疫印迹技术（Western Blot）法检测分离小鼠皮质及海马,RIPA裂解液提取蛋白,用Western blot的技术检测Aβ生成相关蛋白、内质网应激相关蛋白、Foxred2等蛋白表达。实验结果1、水迷宫结果如下:造模前,与WT小鼠相比,PLTP-Tg小鼠在空间探索实验中逃生潜伏期明显缩短、经过逃生平台的次数明显增多;复制AD模型后,与对照组相比,模型组小鼠逃生潜伏期明显延长,经过平台所在区域的次数明显减少,在平台所在区域停留时间明显缩短;与模型组相比,PLTP-Tg小鼠逃生潜伏期明显缩短,进入平台所在区域的次数明显增多,在平台所在区域停留时间明显延长。2、ELISA结果显示,PLTP过表达使小鼠脑组织海马区的Aβ140,Aβ142蛋白含量以及皮质区的Aβ142蛋白含量明显减少的。3、硫黄素S染色显示,PLTP过表达能够明显减少脑组织中老年斑的数量。4、体外检测各组20S蛋白酶体的活性,结果显示:发现无论是在皮质区还是海马区,PLTP过表达能够明显增强20S蛋白酶体的活性。5、Western blot结果显示,PLTP过表达能够显著降低小鼠海马区APP、PS1、GRP78的蛋白含量,降低小鼠皮质区Capase12蛋白的含量;无论是在小鼠海马区还是在皮质区,PLTP过表达都能够显著降低BACE1、Foxred2的蛋白含量。实验结论1、PLTP过表达能够改善Aβ诱导AD小鼠模型前后的学习记忆能力。2、PLTP过表达对小鼠学习记忆的改善可能与调控Aβ生成相关蛋白的表达有关。3、PLTP过表达对Aβ的影响可能与下调foxred2进而增强蛋白酶体活性、改善内质网应激有关。