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结肠癌是人类高发恶性肿瘤之一,近年来其发病率一直呈上升趋势,在全球恶性肿瘤发病率中已上升至第三位,其死亡率居恶性肿瘤死因的第二位。在我国,结直肠癌死亡率已位于恶性肿瘤死亡率的第五位,严重危害人类健康。在结肠癌的发展过程中,常常涉及到多种蛋白质表达的改变,可作为结肠癌发生、发展及预后的肿瘤标志物。已有研究发现,人类蛋白酶体激活因子亚基2(PSME2或PA28β)可导致细胞增殖和恶性程度的变化,其表达下降与胃腺癌的发生发展有关。同时有研究表明,PSME2基因在肝癌、乳腺癌和肾癌组织中的表达发生改变,也有报道PSME2在结肠癌中低表达。本试验以PSME2基因为切入点,探讨其RNA干扰及高表达对结肠癌增殖的影响,为肿瘤的免疫疗法奠定基础。本试验通过基因克隆,原核表达,构建RNA干扰及高表达载体,对细胞进行转染。应用Real-time PCR检测结肠癌HCT-8细胞PSME2基因的mRNA表达水平;Western-blotting检测结肠癌HCT-8细胞PSME2基因的转录水平;MTT检测RNA干扰及高表达对结肠癌HCT-8细胞增殖的影响;动物实验检测RNA干扰及高表达对结肠癌HCT-8肿瘤增殖的影响。Real-time PCR结果显示,转染RNA干扰质粒组(U6/GFP/Neo-PSME2-homo-1、U6/GFP/Neo-PSME2-homo-2、U6/GFP/Neo-PSME2-homo-3、U6/GFP/Neo-PSME2-homo-4)结肠癌HCT-8细胞PSME2基因的mRNA表达水平下降(2-ΔΔCT<0.5),而转染高表达质粒组(pEGFP-C1-PSME2)mRNA表达水平上升(2-ΔΔCT>2),转染阴性对照质粒组(pEGFP-C1、U6/GFP/Neo-shNC、U6/GFP/Neo-shhGAPDH)mRNA表达水平与空白对照组差异不明显(2-ΔΔCT>0.5)。Western-blotting结果显示,4组转染RNA干扰质粒组结肠癌HCT-8细胞PSME2基因翻译的PA28β表达量下降,转染高表达质粒组的PA28β表达量上升,阴性对照组与空白对照组差异不明显。同时利用MTT法对各组细胞增殖情况进行研究,结果发现,RNA干扰组的细胞增殖明显快于空白对照组(P<0.05),高表达质粒组的细胞增殖缓慢(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异不显著。通过动物试验,成功建立结肠癌HCT-8细胞裸鼠肿瘤移植模型。治疗试验结果显示,PSME2基因的高表达明显使HCT-8细胞裸鼠移植肿瘤缩小(P<0.05),其抑制率为56.77%,而PSME2基因RNA干扰组的HCT-8细胞裸鼠移植肿瘤增长速度明显比空白对照组快。