柑桔无核是柑桔遗传育种中一个重要的研究领域，它对于柑桔的鲜食和食品加工具有重要的意义。我国的柑桔品种资源十分丰富，地方良种很多。但是，栽培品种多为有核甚至是多核的，这样就严重影响了我国柑桔的商品价值和在国际消费市场上的竞争力。 本研究以我国优良的柑桔品种锦橙为试验材料，通过染色体步移技术获得柑桔胚胎发育过程中组织特异性表达基因的启动子，并利用基因工程的原理，构建了该组织特异性启动子的缺失载体，以分析启动子各片段的功能。为今后人工阻断胚胎发育的某一进程，使胚胎停止发育，最后获得基因工程的柑桔无核新品种奠定理论和技术基础。 以锦橙总DNA为模板，通过设计嵌套引物，利用加接头的染色体步移技术，结合巢式PCR、降落PCR、热启动PCR和两步PCR的特点，克隆了长为2054bp的柑桔种子球蛋白基因部分序列及其上游调控序列，克隆片段命名为ssp。 启动子数据库plant CARE分析表明，长度为1894bp的上游调控序列为一条未经报道的新序列。在启动子数据库中的分析表明，该序列具有种子专一性表达启动子的基本特征，具备与转录起始有关的TATA盒、辅助转译的CAAT盒和RY-element、ABA-induced应答元件等与种子发育密切相关的调控元件。 用植物双元表达载体pCAMBIA3301，将ssp从ATG开始的上游调控区分别缺失0bp，389bp，846bp，1186bp和1525bp，构建了5个双元表达载体p-A-gus、p-B-gus、p-C-gus、p-D-gus、p-N-gus。 构建的p-A-gus双元表达质粒利用根癌农杆菌介导法转化烟草，仅在转基因烟草的种子中检测到GUS表达，从而用实验证明该上游调控序列具有种子特异性调控表达的特性。这是在甜橙中获得组织特异性启动子的首次报道。