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目的：构建小鼠成熟自然杀伤T（Natural killer T，NKT）细胞来源的诱导型多潜能干细胞（NKT-induced pluripotent stem cell，NKT-iPSC）克隆小鼠，通过体内实验探讨NKT细胞命运是否由T细胞受体（T cell receptor，TCR）α链或α链和β链的基因重组决定，并为NKT细胞发育和功能的体内研究提供更有效的动物模型。本研究应用由WT C57BL/6（B6）小鼠成熟NKT细胞重编程获得的NKT-iPSC，成功构建了两种NKT-iPSC克隆小鼠，分别为已重组Vα14基因和野生型Vβ基因的Vα14/WTVβ小鼠及已重组Vα14基因和已重组Vβ7基因的Vα14/Vβ7小鼠。利用流式细胞术对两种NKT-iPSC克隆小鼠胸腺、脾脏和肝脏NKT细胞数进行检测，发现两种NKT-iPSC克隆小鼠三种器官NKT细胞数量均显著高于对照组小鼠（B6小鼠）。流式细胞术和qPCR结果显示，NKT细胞发育相关因子CD1d、Ly108、SAP、Fyn、Myb、Myc、Runx1、HEB及Egr2在NKT-iPSC克隆小鼠胸腺CD4/CD8双阳性细胞（NKT前体细胞所在细胞群）中表达水平与在B6小鼠中无显著区别。流式细胞术检测结果显示，两种NKT-iPSC克隆小鼠胸腺、脾脏和肝脏中CD4-IL-17RB+、CD4+IL-17RB+以及IL-17RB-NKT亚群细胞数均高于B6小鼠。体外利用PMA刺激NKT细胞后，通过细胞内荧光染色法检测IFNγ＋、IL-4＋及IL-17A＋NKT细胞的比率和数量，发现Vα14/WTVβ小鼠3种器官中产生IFNγ、IL-4和IL-17A的NKT细胞数均显著高于B6小鼠；而Vα14/Vβ7小鼠体内产生IL-4和IL-17A的NKT亚群细胞数在胸腺中明显少于B6小鼠，但在脾脏和肝脏中显著高于B6小鼠。利用流式细胞术检测未成熟标记CD24和CD62L在NKT-iPSC克隆小鼠胸腺及肝脏NKT细胞表面的表达，结果显示Vα14/Vβ7小鼠胸腺NKT细胞表面大量表达CD24和CD62L，而肝脏NKT细胞表面这两个标志物的表达则明显减低，提示Vα14/Vβ7小鼠体内NKT细胞在外周免疫器官中获得了功能的成熟。对两种克隆小鼠体内其他免疫细胞的分析发现，在NKT-iPSC克隆小鼠体内无γδT细胞以及CD4T细胞的发育受影响数量减少，而CD8T细胞、NK细胞、B细胞以及树突状细胞均正常发育。本实验应用由B6小鼠成熟NKT细胞重编程获得的NKT-iPSC，成功构建了两种NKT-iPSC克隆小鼠。通过对两种NKT-iPSC克隆小鼠体内NKT细胞数量、发育、功能和成熟，以及其他免疫细胞发育的检测，证明TCR Vα14而非Vβ7基因的重组决定NKT细胞命运。此外，本研究可以证明NKT-iPSC克隆小鼠拥有较完全及发育正常的免疫系统，更利于NKT细胞发育和功能的体内研究。