论文部分内容阅读
目的：观察输注外源性骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stemcells，MSCs)对庆大霉素(Gentamycin，GM)诱导的大鼠急性肾损伤是否具有保护作用，并初探其机制。
方法：1．MSCs的分离培养与鉴定：本实验对传统的贴壁培养法进行改进，分离纯化大鼠MSCs，体外培养和连续传代，在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化；流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原。2．大鼠药源性急性肾损伤模型制备：腹腔注射庆大霉素100mg/kg，连续7d，制备大鼠急性肾损伤模型。3．测定血清BUN和Cr含量评价肾功能。4．HE染色方法光镜下观察肾组织病理形态学改变，TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。5．免疫印迹法及RT-PCR检测肾组织中肝细胞生长因子(HGF)及其mRNA表达，免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Fas和FasL的表达水平。6．实验分组：大鼠随机分为正常对照组、模型组、生理盐水组、MSCs输注组；MSCs输注组和生理盐水组分别尾静脉注射MSCs1×106和等体积生理盐水。
结果：1．原代分离的大鼠MSCs在接种后48h贴壁，细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形，10天时细胞呈长梭形并达到90％单层融合，经传代扩增，细胞进一步纯化； FCM检测CD44、CD90阳性率分别为98.42±1.14％、97.6±1.85％；表明所获得的细胞为MSCs。2．与正常对照组相比，腹腔注射庆大霉素所致模型组大鼠血清BUN和Cr含量明显升高(P＜0.01)，肾组织损伤严重，凋亡的肾小管上皮细胞明显增多，表明庆大霉素所致急性肾损伤大鼠模型制备成功。3．MSCs输注可以明显降低庆大霉素所致急性肾损伤大鼠血清BUN和Cr含量(P＜0.01)，减轻肾组织病理形态学改变，明显减少凋亡的肾小管上皮细胞，上调HGF的表达(P＜0.01)，下调Fas和FasL的表达(P＜0.01)。
结论：本研究对传统的贴壁分离法进行改进，能有效分离纯化大鼠MSCs;MSCs输注可减轻庆大霉素所致大鼠急性肾损伤肾脏病理形态学改变，改善肾功能其机制可能与上调HGF的表达，促进受损肾组织的修复，以及下调Fas及FasL蛋白的表达、减轻肾小管上皮细胞的凋亡相关。