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目的：研究对照品替代法在高效液相色谱法含量测定中的应用,建立以大黄素为替代物测定贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素含量的方法；初步建立HPLC-ELSD法定量分析胆汁类药材及其制剂中8种胆酸类成分,探讨胆酸类多成分替代法的可行性。方法：采用HPLC-DAD和HPLC-MS,通过定性和定量手段分别求得被测成分相对于替代物的计算因子,从而实现以大黄素为替代对照品,测定样品中金丝桃素、伪金丝桃素的含量,并考察仪器波长、色谱柱类型、流动相pH值及洗脱梯度对校正因子的影响。方法是使用C18色谱柱,以10mmol·L-1醋酸铵溶液(以醋酸调pH至4)-乙腈为流动相梯度洗脱,流速：1.0ml·min-1,柱温30℃,DAD检测波长284nm；质谱条件是采用Agilent SB-C18(150mm×2.1mm,1.8μm)色谱柱,以10mmol·L-1pH4醋酸铵溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速：0.4ml·min-1；柱温30℃; MS-ESI检测器：正离子模式,去溶剂温度度300℃,去溶剂气(N2)流速：10L·min-1,雾化气压力241Pa,毛细管电压4kv,离子扫描范围m/z100～600,选定m/z269.1,503.2,519.2,535.5进行选择性离子扫描(SIM)。采用HPLC-ELSD法测定54种胆汁类药材及其制剂中的胆酸类成分含量,通过统计学方法初步研究比较8种胆酸类成分标准曲线之间的关系,进行胆酸类多成分替代法尝试。方法是以Thermo ODS-2HYPERSIL (250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以0.5%甲酸(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速1.0ml·min-1; ELSD蒸发光散射检测器：漂移管温度105℃,载气流速2.2L·min-1结果：大黄素、金丝桃素、伪金丝桃素在0.024～1.194μg,0.02～1.00μg,0.02～1.00μg,0.10～4.00μg范围内线性关系良好,回收率分别为101.4(RSD=2.0%),102.3(RSD=3.5%),101.4(RSD=2.8%),以大黄素为替代测定金丝桃素和伪金丝桃素的校正因子f分别为1.26(RSD=1.5%)和1.22(RSD=1.1%),此方法与常规外标法的测定结果基本一致。初步建立8种胆酸类成分标准曲线之间的关系,获得了动物胆汁及其制剂中8种胆酸类成分的指纹图谱。结论：金丝桃素对照品替代法经济、实用、快速、高效,可用于贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏而给含量测定带来的困难,大大降低了分析检测的成本。HPLC-ELSD法同时测定8种胆酸类成分的方法可用于不同胆汁类药材及其制剂的鉴别和质量控制；HPLC-ELSD法胆酸类多成分替代理论上存在可行性,但是受仪器波动等因素影响较大,还需进一步研究改进。