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目的构建弓形虫昆山分离株P30基因的乳酸乳球菌表达质粒L2Ps-P30-T，并在乳酸乳球菌中表达P30基因，然后用表达弓形虫P30蛋白的乳酸乳球菌口服免疫小鼠，观察表达弓形虫P30蛋白的乳酸乳球菌所诱导小鼠的体液免疫、黏膜免疫水平及对弓形虫感染的保护力。方法以BamHI及XhoI限制性内切酶将P30从构建好的质粒pSK-P30中切出并克隆至构建好的质粒pSK-PsT，构建成pSK-Ps-P30-T质粒，用PvuII限制性内切酶将表达元件-Ps-P30-T-从pSK-Ps-P30-T质粒中切出，用相同的酶切位点导入大肠杆菌和乳球菌穿梭质粒pTRKL2，构建成L2Ps-P30-T质粒，通过电转化技术将L2Ps-P30-T导入至乳酸乳球菌，用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定P30在乳酸乳球菌中的表达。选用69只体重为（18±2）g健康雌性BALB/c小鼠，将小鼠随机分组为疫苗免疫组、乳球菌对照组和生理盐水组，每次每只小鼠分别饲喂5×109个的表达弓形虫P30蛋白的乳酸乳球菌悬液、不含重组质粒的乳酸乳球菌悬液和等体积的生理盐水。分别在喂食小鼠后第27、34及48天从小鼠尾静脉采血、分离血清，用ELISA（酶联免疫吸附试验）检测小鼠血清中IgG水平；在喂食小鼠后第48天每组杀死3只小鼠，分离小鼠的小肠黏液及脾细胞，检测小肠黏液中的SIgA水平；培养脾细胞，检测培养上清中INF-γ、IL-4和IL-10水平。同时第48天用弓形虫灌胃感染每组剩下的其他小鼠（每组20只），感染后记录小鼠的发病情况，计算小鼠死亡率，小鼠灌胃感染30d后解剖小鼠并统计小鼠肝、脑组织中的虫体数量，统计学分析结果。结果用酶切及PCR方法鉴定质粒L2pS-P30-T构建正确。SDS-PAGE电泳没有检测到P30蛋白的表达。但Western blotting检测到乳球菌中表达能被弓形虫病人血清识别的约30kDa蛋白。小鼠血清中抗P30IgG水平随时间增高，小鼠血清中IgG水平疫苗免疫组与乳球菌对照组、生理盐水组比较，其存在的差异均有统计学意义（P <0.01）。乳球菌对照组与生理盐水组比较其差异没有统计学意义（P>0.05）；小鼠小肠黏液中的SIgA水平疫苗免疫组与乳球菌对照组、生理盐水组比较，其存在的差异均有统计学意义（P<0.01）。乳球菌对照组与生理盐水组比较其差异没有统计学意义（P>0.05）；弓形虫灌胃感染后的小鼠肝、脑组织中虫体数疫苗免疫组与乳球菌对照组、生理盐水组比较，其存在的差异有统计学意义（P>0.05）。乳球菌对照组、生理盐水组比较，其存在的差异无统计学意义结论1弓形虫昆山分离株P30基因的乳酸乳球菌表达载体质粒L2pS-P30-T构建正确。2P30在乳酸乳球菌中得到了表达，但表达量低。3表达弓形虫P30蛋白的乳酸乳球菌可诱导小鼠的黏膜免疫和体液免疫，对弓形虫感染能产生一定的保护力。