大肠杆菌NZN111是乳酸脱氢酶和丙酮酸甲酸裂解酶的双突变菌株，在厌氧情况下失去了生长和耗糖的能力。本文主要研究在大肠杆菌NZN111中过量表达苹果酸脱氢酶(MDH)对于菌体生长、葡萄糖消耗和琥珀酸生产的影响。 本研究首先克隆了表达MDH的基因mdh，将其与载体质粒pTrc99A连接，构建得到pTrc99A—mdh质粒；然后将pTrc99A和pTrc99A—mdh分别转入NZN111中，得到对照株NZN111/pTrc99A和MDH过量表达株NZN111/pTrc99A—mdh。对上述两株菌的厌氧发酵研究发现，在不含有碳酸氢钠的复合培养基中，经0.1mM IPTG诱导过量表达MDH的菌株恢复了厌氧生长和糖耗能力，发酵72h后，菌体浓度达到0.8-0.9(OD600)，但发酵产物以乙酸为主；在添加碳酸氢钠后，NZN111/pTrc99A—mdh和NZN111/pTrc99A中葡萄糖消耗速率和琥珀酸生产能力都有明显提高，但是在过量表达MDH后，菌体的葡萄糖比消耗速率和琥珀酸比生产速率较未过量表达MDH时均有明显提高。在生物反应器发酵实验中，葡萄糖比消耗速率和琥珀酸比生产速率较对照株分别提高了25％和27％，达到0.67g/g dry cell·h和510 mg/g dry cell·h，而两菌株中琥珀酸得率可达到1.17-1.19mol/mol葡萄糖。 经过对四种关键酶的酶活分析发现，在同样添加10g/L碳酸氢钠的发酵培养基中，NZN111/pTrc99A和NZN111/pTrc99A—mdh中的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和苹果酸酶活性相当，但在MDH过量表达株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活性较对照株提高了1.7倍，并且MDH经过量过量表达后活性提高了24倍。