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血小板减少性紫癜原名为“特发性血小板减少性紫癜(Idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP)",是一种由于患者体内产生抗自身血小板抗体引起血小板破坏增多,从而导致外周血中血小板持续减少,骨髓巨核细胞数正常或增多伴有成熟障碍为特征的出血性疾病。本研究目的在于探讨CITP中医辨病辨证治疗思路与方案,并验证参桂益气温阳汤治疗CITP的临床疗效,补充和丰富CITP中医治疗思想,为CITP中医系统化治疗提供参考。探讨CITP患者排除激素干扰下免疫功能紊乱状态。结合T-bet/GATA-3、Foxp3 mRNA转录等分子生物学研究,进一步阐明疗效机制。一、临床疗效研究本研究结果显示,治疗组总病例数为28例,显效4例(14.29%)；良效3例(10.74%)；进步5例(17.86%)；无效16例(57.14%)；总有效12例；总有效率42.86%。治疗前中位Plt计数23.02±13.69；治疗后中位计数46.18±50.47,治疗前后血小板变化具有统计意义(P<0.05)。说明参桂益气温阳汤一定程度提高外周血小板水平。后期观察6个月,显效病例中1例4个月后plt降至80×109／L,目前波动在80×109/L-90×109/L,余病例病情稳定。全部病例观察期间未出现不适不良反应。二、参桂益气温阳汤疗效机理研究治疗组符合入组条件CITP病例共25例,男：女=1：1.5,中位年龄35.82±17.70。健康空白对照20例,男：女=1：1.14,中位年龄33.45±15.42。两组性别比例及中位年龄无明显差异(P>0.05)。利用美国BECKMAN COULTER公司流式细胞仪检测CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、CD4+／CD8+比例、CD3+D25+活化T细胞、CD3+DR+活化T细胞、CD4+CD25+Treg细胞、NKT细胞、NK细胞、CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞及Th1/Th2/Th0治疗前后表达变化。此次淋巴细胞亚群研究提示,CITP患者机体免疫紊乱中Treg细胞和CD19+CD5+B细胞比例下调及功能缺陷、以及总T细胞、CTL细胞、NKT细胞、CD3DR+活化T细胞的功能亢进是其致病机制中重要环节。治疗前后研究提示,参桂益气温阳汤通过显著降低总T细胞、NKT细胞、CD3DR+活化T细胞比值；升高CD19+CD5+／CD19+比值、CD4+CD25+Treg细胞和Th2细胞,起到免疫调节和免疫耐受作用,有助于改善外周血小板水平。值得注意的是,治疗无效组CTL细胞和CD3+DR+活化T细胞高表达,并不因治疗干预而下降,说明CTL细胞和CD3+DR+活化T细胞功能增强可能与外周血小板持续破坏有关。经SPSS statistics 17.0进行多元逐步回归分析,提示治疗前后各项T、B淋巴细胞亚群与PBC之间无线性相关性。三、转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3mRNA研究利用实时定量逆转录PCR检测治疗前后转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3mRNA转录水平,探讨与Th1、Th2、CD4+CD25+Treg细胞以及PBC间相关性。结果显示：治疗组治疗前GATA-3mRNA转录水平显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01),经治疗表达水平显著下降,治疗前后变化具有显著性差异(P<0.01),治疗后与健康对照无统计学差异。Foxp3mRNA转录水平治疗前与健康对照无差异,治疗后Foxp3mRNA表达显著低于健康对照,具有显著性差异(P＜0.05)。治疗前GATA-3mRNA转录水平增强考虑与机体的基因层面自身调控有关,通过GATA-3mRNA高表达,使Th平衡向Th2优势漂移,有利于免疫耐受和病情缓解,且随着治疗反应和Treg调节细胞的上升而表达逐渐下降,符合疾病的缓解过程。Foxp3mRNA转录水平经治疗有所下降,说明随着疾病缓解外周Treg调节细胞比例显著上升和功能增强,负反馈地调节基因转录水平,使其表达下调。证明Foxp3虽然是Treg特异性调控因子,但也接受Treg的负反馈调节,这是机体动态平衡奥妙所在。运用SPSS statistics17.0统计软件对治疗前后转录因子T-bet与Th1、GATA-3与Th2、Foxp3与Treg细胞进行双变量相关分析,结果显示各转录因子与调控靶细胞之间无线性相关性(P＞0.05)。运用SPSS统计软件对治疗前后转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3三因素间进行双变量相关分析。结果显示：治疗前,T-bet与GATA-3呈负相关(P＜0.05),但相关性不甚密切(相关系数<0.5)；与Foxp3呈显著负相关(P＜0.01,相关系数>0.5)。治疗后,Foxp3与GATA-3之间呈现正相关关系(P<0.05),相关系数为0.427。提示CITP慢性期Foxp3、GATA-3和T-bet之间存在相互制约关系,这符合CITP疾病状态及各转录因子的功能。缓解期Foxp3和GATA-3转录相伴降低,说明随着外周Treg调节细胞的恢复和功能增强,通过负反馈机制降低了Foxp3和GATA-3转录水平。运用SPSS statistics17.0多元逐步回归分析进一步探讨转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3表达与PBC之间相关性。结果显示,治疗后GATA-3与PBC呈负相关,P=0.032(P＜0.05),得出方程式plt=90.299-64.086gata。说明疾病缓解,外周血小板上升与GATA-3转录水平下降有一定相关性。本研究尚存在不足之处。一、转录因子及淋巴细胞亚群为敏感性实验指标,随着疾病状态变化而波动,本实验观察期4-5个月,只是抽取治疗前后血样作为研究指标,有可能丢失了动态变化过程,不利于全面客观地阐述致病机理。本研究不排除错过了捕捉和研究转录因子动态变化的机会。二、治疗有效病例数有限,相对影响了疗效机理研究的客观性,难免存在统计误差。本研究提示CITP疾病未缓解状态与CD3+CD8+CTL细胞和CD3+R+活化T细胞高表达密切相关。据此设想今后研究中加强CTL细胞、活化T细胞的研究深度,随着颗粒酶、穿孔素,IL-2、IFN-γ的血浆浓度变化和相关基因调控机理的明晰,将有助于进一步阐明CITP致病机理。