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研究背景:胃癌(Gastric cancer,GC)是世界上常见的恶性肿瘤之一,其发病率、死亡率高居所有癌症中第二位,仅次于肺癌;虽然早期GC患者手术后再化疗,患者5年生存率可达90%。但临床缺乏早期特异性诊断标记物,70%以上患者确诊后已进入晚期,晚期患者则需借助靶向药物治疗。因此探索GC发病的分子作用机制,可提供GC的特异性诊断标记物和靶向药物研究的分子靶点,对GC的防治具有重大意义。SUMO特异性蛋白酶(SUMO-specific proteases,SENPs)家族成员包括SENP1-3和SENP5-7,均与肿瘤发生发展有关,其中SENP2是多种癌症中是抑癌因子,通过去SUMO化维持蛋白稳定和抑制肿瘤相关信号通路的活化来发挥抑瘤作用。而同属于抑癌因子的N-myc下游调节基因2(N-Myc downstream regulated gene2,NDRG2)在肿瘤组织中被甲基化或SUMO化,从而失活或被降解,丧失抑瘤效果。但SENP2在GC组织中的表达特性及对NDRG2稳定性的影响及作用机制现阶段还未见报道。研究目的:探讨SENP2在GC组织中的表达特性以及对GC细胞增殖的影响;探讨SENP2对GC细胞中NDRG2稳定性的影响及调控机制研究。为SENP2在防治GC方面的潜在价值提供理论研究基础。研究方法:1、采用RT-qPCR及Western blot检测GC组织和癌旁正常组织中SENP 2mRNA和蛋白的表达水平。2、采用RT-qPCR及Western blot检测检测GC细胞系AGS、BGC823、MGC803、NCI-N87和SGC7901中SENP2mRNA和蛋白的基础表达水平,并选择SENP2表达水平最高的细胞系,观察沉默其SENP2对细胞增殖的影响。3、采用免疫共沉淀检测SENP2和NDRG2相互作用关系。4、将SENP1~3和SENP5~7过表达质粒转染AGS细胞,通过Western blot检测SENP2及其家族成员对NDRG2的稳定性作用。5、沉默AGS细胞中的SENP2,观察对NDRG2的稳定性和泛素化影响6、将HA-NDRG2+Myc-Sumo1质粒,HA-NDRG2+Flag-SENP2WT+Myc-Sumo1质粒,HA-NDRG2+Flag-SENP2 CA+Myc-Sumo1质粒转染293T细胞;以及采用MG132干预AGS(Vector)细胞和AGS(SENP2-shRNA)细胞,通过免疫共沉淀观察SENP2对NDGR2去SUMO化的作用研究结果:1、与癌旁正常组织比较,GC组织中SENP2的mRNA和蛋白表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.001)。2、与对照组比较,沉默AGS细胞中SENP2显著促进了AGS细胞的增殖(P<0.001)。3、通过免疫共沉淀结果显示SENP2与NDRG2可直接相互作用。4、通过Western blot检测显示转染SENP2过表达载体的AGS细胞中NDRG2的稳定性明显高于转染SENP1、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7过表达载体的AGS细胞。5、通过免疫共沉淀检测显示沉默AGS细胞的SENP2显著增加了NDRG2的泛素化水平。6、通过免疫共沉淀检测显示突变或沉默SENP2均使NDRG2的去SUMO化水平降低。研究结论:1、GC组织中SENP2表达下调并促进了GC细胞的增殖。2、SENP2是SENPs家族中唯一增强NDRG2稳定性的成员。3、GC细胞中SENP2抑制NDRG2的SUMO化和泛素化,是维持NDRG2稳定性的机制之一。