异种核移植研究为濒危动物保护和发育生物学基础理论的研究开拓了新的思路和研究方向。本研究以日本大耳白兔为实验对象，以兔卵母细胞、兔胚胎为材料研究细胞骨架抑制剂对兔卵母细胞孤雌发育的影响、兔胚胎细胞间隙连接的建立时间及与胚胎质量的关系，比较两种去核方法对异种重构胚体外发育的影响，未经休眠处理的不同供体细胞与去核兔卵母细胞构建的异种重构胚的发育能力，应用脂质体介导的方法获得表达绿色荧光蛋白的细胞，并以表达绿色荧光蛋白的细胞为核供体研究绿色荧光蛋白在异种重构胚早期发育中的表达，从核移植的基本影响因素、异种核移植、转基因异种核移植三个层次，对以去核兔卵母细胞胞质为受体的异种核移植研究进行探讨。结果如下： 1、细胞骨架抑制剂处理兔卵母细胞后，应用电激活的方法孤雌激活卵母细胞结果发现：7.5μg／mL细胞松弛素B处理卵母细胞1-1.5小时后对兔卵母细胞的孤雌激活没有明显的影响，其2-细胞分裂率(82.2％)和囊胚发育率(43.4％)与对照组(76.4％和51.5％)相比没有显著差异(P＞0.05)；用1.0μg／mL秋水仙素处理兔卵母细胞1-1.5小时，兔卵母细胞孤雌激活后的2-细胞率(64.9％)和囊胚发育率(23.8％)明显下降，与对照组相比存在着显著差异(P＜0.05)；用细胞松弛素B和秋水仙素共同处理的结果与秋水仙素单独处理的结果类似(2-细胞率为62.5％；囊胚率为30.9％)。免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察发现，细胞骨架抑制剂处理后，经孤雌激活获得的囊胚中，微丝和微管结构未见异常。 2、未经休眠处理的大熊猫、牛、小鼠体细胞和小鼠ES细胞通过显微操作、电融合的方法移入去核兔卵母细胞胞质，构建异种重构胚。结果发现，兔卵胞质可以支持异种重构胚体外发育到囊胚，应用牛耳成纤维细胞、小鼠颗粒细胞、大熊猫体细胞和小鼠ES细胞进行显微操作后的融合率分别为58.5％、54.8％、61.8％、71.3％，以小鼠ES细胞的融合率最高，与几种体细胞供核组相比差异显著(P＜0.05)，其他几种体细胞供核组融合率无显著差异(P＞0.05)。小鼠ES细胞组囊胚发育率最高(13.8％)，与其它几组差异显著(牛，4.17％；小鼠，1.25％；大熊猫，4.7％)(P＜0.05)，几种体细胞供核组间囊胚发育率无显著差异(P＞0.05)；研究表明以兔卵母细胞胞质为受体、ES细胞作为核供体，重构胚的囊胚发育率较高，大熊猫和牛体细胞作为核供体的异种重构胚囊胚发育率相近，小鼠体细胞作为核供体，重构胚的囊胚发育率最低。 3、应用脂质体介导绿色荧光蛋白基因转染大熊猫成纤维细胞，用G418筛选转基因阳性细胞。结果发现，绿色荧光蛋白可以在转染后24-48小时和G418筛选后的大熊猫成纤维细胞中得到瞬时和稳定表达；大熊猫成纤维细胞转基因阳性细胞的最佳G418筛选浓度为400μg／mL；应用流式细胞分析技术对不同转染条件下绿色荧光蛋白在大熊猫成纤维细胞中的瞬时表达进行定量分析，发现10μl／m1脂质体和3μg／ml DNA的转染条件可以获得37.4％表达绿色荧光的细胞，是大熊猫成纤维细胞利用脂质体介导法进行基因转染的最佳条件，与其他条件相比存在极显著差异。 中文摘要4、应用脂质体介导法将包含绿色荧光蛋白基因的质粒DNA（P’‘’＊’）分别转染大熊猫成纤维细胞、牛耳成纤维细胞和小鼠成纤维细胞，转染后48小时，经G418筛选，将稳定表达绿色荧光蛋白的细胞通过显懈作、电融合的方法移入去核兔卵母细胞，构建异种重构胚，在重构胚发育过程中检测绿色荧光蛋白的表达。结果发现，在异种重构胚的不同发育阶段，均检测到绿色荧光；类合子核期表达绿色荧光蛋白的比率分别为 60．7％（大袁猫一兔）、54．3％（牛一兔）、36．8％（，］、鼠一兔），大熊4苗一兔与，J、鼠－兔异种重构胚类合子核期绿色荧光蛋白的表达差异显著（P刎．05）；大熊猫－兔与牛－兔异种重构胚类合子核期绿色荧光蛋白的表达无显著性差异门叩．05），牛－兔与小鼠－兔异种重构胚类合子核期绿色荧光蛋白的表达无显著性差异①叩．05h 大熊猫－兔、牛－兔表达绿色荧光蛋白的重构卜细胞 门5．9丸52们、个细胞门9．州，16们、8一细胞（8．8％，8％）和囊胚（2．9％，4％）发育率无显著差异（P＞0．05）。5、应用化学去核结合末期去核法对兔成熟卵母细胞进行去核处理，并以盲吸法作为对照，结果发现：应用两种去核方法重构胚都可以发育到囊胚，重构卵的的融合率分别为61．8％（盲吸法）和66．7％（化学去核法结合末期去核法）；二者之间没有显著差异u叩．05）；用两种去核方法所获得的 2－细胞发育率分别为 52．7％（盲吸法）和 59．5％（化学去核结合末期去核法），二者之间没有显著差异；化学去核法结合末期去核法的囊胚发育率门2．0％）明显高于盲吸法的囊胚发育率＊．7％），二者之间存在显著差异门叩．05）；应用免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜对应用化学去核结合末期去核法所获得的囊胚检测发现，重构胚的纺锤体结构未见异常。6、应用激光扫描共聚焦显敝的光漂白恢复技术吓RAP）分析兔早期胚胎卵裂球之间通过间隙连接介导的?