目的：变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)的致龋性与菌斑生物膜在牙面附着密切相关，菌斑生物膜的形成又与胞外多糖(extracellular polysaccharides， EPS)关系密切。葡萄糖基转移酶(glucosyl transferases， GTFs)作为S.mutans致龋过程中的关键酶，早已被证明是影响变异链球菌致龋性的重要毒力因子，其催化合成了水溶性及水不溶性葡聚糖，后者不仅是胞外多糖中的重要组成部分，更影响了S.mutans对牙面的黏附过程及菌斑生物膜的形成过程。高温需要A蛋白(high temperature requirement serine proteinase A，HtrA)作为链球菌属广泛表达的一种丝氨酸蛋白，同时具有分子伴侣功能和蛋白水解活性，其在细菌的生长、压力感受、错构蛋白的降解、正常蛋白的处理和成熟等方面起重要的调控作用。HtrA基因也存在于变异链球菌中，但其对葡萄糖基转移酶(GTFs)是否有影响，如何影响尚未明确。故本研究旨在运用分子生物学技术，通过对比乳牙变异链球菌HtrA基因缺陷株和乳牙变异链球菌HtrA高毒力株(以下简称HtrA基因缺陷株、HtrA高毒力株)在体外非应激环境中葡萄糖基转移酶信使核糖核苷酸的量、蛋白质的量及蛋白生物学活性的差异以探究乳牙变异链球菌致龋过程中HtrA基因对关键毒力因子的调控作用，推导其致龋机制，从而判断其在致龋过程中的重要性，为乳牙龋病的防治找到新的靶点。方法：本课题选用的菌株为乳牙高致龋性变异链球菌HtrA基因缺陷株和高毒力株(课题组前期已获得)及变异链球菌标准株(ATCC25175)。复苏各菌株，分别接种至MS培养基，进行形态学鉴定、生化鉴定对比。分别取鉴定后HtrA基因缺陷株、HtrA高毒力株的单一菌落接种于BHI培养基，37℃，厌氧(10％CO2、80%N2、10%H2)培养至指数期第10小时，收集菌液并调整菌液至相同浓度。取同体积两菌液，分别提取总 RNA以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Quantitative Real-time PCR)方法检测两菌株菌液中gtfb，gtfc，gtfd的含量。取同体积两菌液，分别提取HtrA基因缺陷株和HtrA高毒力株的GTFs，调整蛋白浓度后分别加入等体积相同浓度(0.3%)蔗糖溶液，以蒽酮硫酸法检测其生物学活性。以HtrA缺陷株GTFs提取物为抗原辅以福氏完全和不完全佐剂制备GTFs小鼠(BALB/c)抗体。取同批次等体积菌液，分别提取总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，以 GTFs小鼠(BALB/c)抗体为一抗进行蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测GTFB，GTFC，GTFD的含量。结果：经形态学和生化鉴定发现 HtrA高毒力株、HtrA基因缺陷株和变异链球菌ATCC25175标准株细菌形态基本一致，均为长短不一、链状排列，革兰染色均为紫色阳性。HtrA基因缺陷株及高毒力株均可发酵甘露醇、山梨醇、密二糖、棉子糖，水解七叶苷，但不水解精氨酸，与变异链球菌ATCC25175标准株生物学性状相符。GTFs在HtrA基因缺陷株中的RNA及蛋白的表达量均高于HtrA高毒力株，差异具有显著性（P<0.05)。HtrA基因缺陷株GTFs生物学活性低于HtrA高毒力株，差异具有显著性（P<0.05)。结论：HtrA基因在乳牙高致龋性变异链球菌GTFs表达的过程中起重要的调控作用，其不仅参与GTFs表达的调控，而且可能在GTFs的转运过程中也起重要调控作用，相关机制有待进一步研究证明。