目的: 利用庆大霉素(Gentamincin，GM)耳毒性的离体和整体模型，在中医理论指导下，通过逐层拆方，研究耳聋左慈丸及其拆方对GM耳毒性的拮抗作用，以探讨耳聋左慈丸的作用机制和可能的有效组分，并利用高效液相色谱(HPLC)技术初步分析各拆方在化学成分上的异同，为中医药防治药物性耳中毒提供理论依据和组方思路，深化中医对耳毒性疾病防治的认识，以期指导临床合理用药，提高中医药对耳毒性疾病的防治效果。 方法: 1．利用小鼠耳蜗螺旋器的离体培养模型，原代培养耳蜗毛细胞，荧光免疫组化显示内、外毛细胞，进行耳蜗毛细胞定量分析，复制GM离体损伤模型，观察GM对离体耳蜗内、外毛细胞的损伤作用及规律。 2．观察耳聋左慈丸全方对GM耳毒性离体培养模型的保护作用，并在中医理论的指导下进行逐层拆方，将耳聋左慈丸拆分成六味、磁柴、补肾药(熟地、泽泻)、养肝药(山茱萸、丹皮)、健脾药(山药、茯苓)、利水药(茯苓、泽泻)以及八个单味药，分析不同的药物配伍对GM耳毒性离体培养模型的影响，筛选有效的药物配伍和(或)单味中药。 3．以短音(2kHz～12kHz，间隔2kHz)诱发的听性脑干反应(auditory brainstem response，ABR)为指标，复制GM整体动物的耳毒性损伤模型(SD大鼠，100mg/kg·d，10天)，比较ABR阈值用药前后的变化(阈移)，观察耳聋左慈丸全方及其拆方对GM模型大鼠听觉功能的影响，探讨耳聋左慈丸的作用效果、机制及组方原理。 4．利用高效液相色谱技术，分析耳聋左慈丸及其拆方在化学成分上的异同，为分析中药的作用机理提供参考。 结果: 1．离体实验中，GM导致的内、外毛细胞损伤呈现出明显的规律性，具有明确、稳定的量效和时效关系，无论是内毛细胞还是外毛细胞，病变都是从底回向顶回发展，并且随着GM浓度的增大和作用时间的延长逐渐加重。在24h的用药时间下，0.3mM GM对内、外毛细胞的损伤程度约50％-60％，0.5mM GM的损伤程度约为70％-80％，是较为适宜的实验条件。 2．离体实验中，六味、磁柴、补肾药、养肝药、利水药、泽泻以及茯苓对0.5mM GM：导致的毛细胞损伤均表现出了拮抗作用。 3．整体动物实验中，GM组造模后(实验第11天)各频率均出现不同程度的阈移，从低频到高频，阈移逐渐增大。实验第22天和第33天重复ABR检测，各频率的阈值未见明显恢复，也未见继续加重。 4．整体动物实验中，补肾药可以拮抗庆大霉素导致的大鼠听功能损伤；利水药对GM模型大鼠听功能的改善作用随用药时间的延长有增强趋势，实验第33天利水组12kHz处的阈移较GM组明显减小；随着用药时间的延长，泽泻单味药有改善GM模型大鼠听功能的趋势；健脾药未表现出改善庆大霉素耳毒性模型大鼠听功能的作用；磁柴拮抗庆大霉素的早期耳毒性反应，但在实验后期动物的听功能表现为下降趋势；养肝药可拮抗庆大霉素的早期耳毒性反应，后期药效有待于进一步的观测；全方对庆大霉素耳毒性模型大鼠的听功能未表现出改善作用。 5．高效液相色谱分析结果显示，养肝药和健脾药与其相应的单味药相比出现了较多的新峰，推测可能在合煎的过程中有新物质产生。补肾药和利水药与其相应的单味药相比，有较多的单味药色谱峰没有在药对中体现，推测在合煎的过程中有可能使单味药中的某些成分发生改变。 结论: 1．补肾药、利水药在离体实验和整体实验中均表现出拮抗庆大霉素耳毒性的作用，推测补肾药和利水药可能是耳聋左慈丸中拮抗GM耳毒性的有效组分，补肾、利水是中医药防治药物性耳中毒的主要治则。 2．泽泻单味药对离体实验中GM所致的毛细胞损伤有拮抗作用，整体实验中有改善听功能的趋势，泽泻组成的药对在离体和整体实验均显示出保护耳蜗毛细胞、改善听功能的作用。 3．养肝药对庆大霉素耳毒性有一定程度的拮抗作用，其药效仍需要进一步的观察。山茱萸和丹皮在单煎和合煎的过程中有较多的化学成分发生改变，可能会影响药物的功效，具体机制及成分分析还有待于进一步的研究。 4．健脾药和磁柴没有显示出拮抗庆大霉素耳毒性的作用，药对中的山药、磁石可能与此有关。 5．耳聋左慈丸全方在离体水平对内耳毛细胞有保护作用，但在整体水平未表现出拮抗庆大霉素耳毒性的作用，推测庆大霉素导致的早期毒性反应病因属于药邪入侵，病位在肾，病性属于邪盛正虚，治则应以祛邪为主，组方原则是：利水不伤阴，祛邪不伤正，扶正不敛邪。临床防治应根据此原则在耳聋左慈丸的基础上进行适当调整，以充分发挥中药的功效。