【摘 要】
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随着现代社会生活方式的改变,非酒精性脂肪肝病已成为最普遍的慢性肝病,其发病机理、预防与治疗已经成为当今营养学与医学的研究热点。研究发现,生物节律参与调控机体行为与各项生理功能,在维持机体代谢正常的过程中发挥着至关重要的作用。菊苣酸作为一种具有抗肥胖抗氧化功效的酚酸类物质,利用其干预非酒精性脂肪肝病已成为食品分子营养领域的研究热点。因此,本实验结合生物节律,研究植物功能成分干预非酒精性脂肪肝病的分子
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随着现代社会生活方式的改变,非酒精性脂肪肝病已成为最普遍的慢性肝病,其发病机理、预防与治疗已经成为当今营养学与医学的研究热点。研究发现,生物节律参与调控机体行为与各项生理功能,在维持机体代谢正常的过程中发挥着至关重要的作用。菊苣酸作为一种具有抗肥胖抗氧化功效的酚酸类物质,利用其干预非酒精性脂肪肝病已成为食品分子营养领域的研究热点。因此,本实验结合生物节律,研究植物功能成分干预非酒精性脂肪肝病的分子机制,为脂代谢紊乱的发生提供了全新的视角,并为进一步开发菊苣酸的生物活性提供强有力的理论依据。本文主要研究内容如下所述:（1）采用人源肝癌细胞HepG2,以100μmol/L游离脂肪酸（Free fatty acids,FFA,油酸:棕榈酸=2:1）模拟非酒精性脂肪肝的病理环境,诱导HepG2细胞脂肪型病变,同时予以50μM、100μM、200μM浓度梯度的菊苣酸干预,探究菊苣酸对脂变性HepG2细胞的改善作用及分子机制。结果显示,菊苣酸可以浓度依赖性地改善细胞形态、胞内脂滴积累、肝细胞脂质水平、缓解细胞氧化应激。此外,菊苣酸显著下调脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）的表达,上调了Akt/GSK3β的磷酸化。（2）Bmal1和Clock基因作为核心节律基因,不仅对产生及维持昼夜节律震荡起着至关重要的作用,还参与了脂肪酸合成和氧化途径。选用高浓度游离脂肪酸（100μmol/L）诱导HepG2细胞发生节律紊乱,探究菊苣酸对节律紊乱调控的分子机制。试验结果显示,菊苣酸可以恢复由高脂引起的节律基因的表达异常。其中正向调控因子Bmal1和Clock有相似波形,Per2、Cry1与Bmal1表达趋势相反。验证了生物节律在分子水平的转录翻译负反馈调节机制。同时,菊苣酸增大了Per1/Per2和Cry1/Cry2以及Reverbα的振幅,上调核心节律蛋白BMAL1和CLOCK的表达。（3）利用小分子RNA干扰技术,使HepG2细胞不表达Bmal1或Clock基因,再用FFA和菊苣酸共同处理,结果发现,沉默Clock或Bmal1基因影响了菊苣酸对SIRT1和PGC-1α的恢复表达,沉默Bmal1基因显著地阻断了Akt/GSK3β信号通路以及FAS和ACC的表达。通过油红O染色观察到沉默Bmal1基因阻碍了菊苣酸的HepG2细胞内的脂滴积累的干预。综上所示,菊苣酸可能通过Bmal1干预Akt/GSK3β信号通路以及FAS和ACC的表达,进而干预细胞内脂质积累,揭示了食品功能组分菊苣酸对非酒精性脂肪肝病干预的潜在可能。
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