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目的1.体外培养、扩增骨髓基质细胞及神经干细胞,并移植入胶质瘤体内,观察比较两种细胞的生物学特性,选择合适的细胞系作为移植供体。2.从SD大鼠脾脏提取TRAIL基因,通过质粒PDC315-TRAIL的构建、鉴定,为包装病毒提供支持。3.将TRAIL通过脂质体转入骨髓间充质干细胞,观察转染后基因的表达情况及细胞的活性,探讨骨髓间充质干细胞作为基因治疗载体的可行性。4.将转染TRAIL的骨髓间充质干细胞同大鼠C6胶质瘤细胞共同培养,观察其对肿瘤细胞生长及凋亡的影响,为进一步研究骨髓间充质干细胞作为转染目的基因的载体移植治疗颅内肿瘤提供明确的依据。方法1.无菌状态下分离出海马区组织,体外培养扩增,并将不同代系的神经干细胞冻存与复苏,通过免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞,观察其生物学特性变化。2.建立胶质瘤模型、骨髓基质细胞移植治疗C6胶质瘤模型和神经干细胞移植治疗C6大鼠胶质瘤模型；待肿瘤生长3w和4w时,三组分别随机抽取4只大鼠行MRI检查；分不同时间段大鼠灌注取材,切取脑组织做石蜡切片,分别做HE染色、GFAP及BrdU免疫组化染色。3.从大鼠脾脏提取TRAIL基因,并构建真核穿梭质粒PDC315-TRAIL。4.将GFP-BMSCs传代至P4-5代时,借助脂质体将SD大鼠TRAIL转入GFP-BMSCs中,免疫荧光检测转染24小时和48小时后的TRAIL蛋白的表达,并比较表达的量。RT-PCR法检测目的基因mRNA水平的表达,Western blot检测转染后TRAIL蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察转染后对GFP-BMSCs生长增殖的影响。5.将转染TRAIL 24小时后的GFP-BMSCs同大鼠C6胶质瘤细胞共培养,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对肿瘤细胞的旁观者效应,Hochest染色检测TRAIL对C6细胞凋亡的影响。结果1.取神经干细胞球细胞免疫化学示nestin阳性：诱导分化的细胞分别呈β-tubulin、GFAP,04免疫化学反应阳性。各代细胞冻存、复苏后细胞的形态、生长速度及其他生物学特性都没有明显改变。2. BMSCs与NSCs移植均是安全的,移植后能够存活分化,且均包绕在肿瘤组织的周围；在肿瘤组织中则很少见到BrdU标记阳性的细胞。BrdU阳性细胞的数量由肿瘤组织外部到肿瘤组织内部呈明显递减趋势。3.成功从SD大鼠脾脏提取TRAIL基因,PCR产物回收873bp大小片段；经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切,克隆产物已经通过上海生工生物技术有限公司测序鉴定。该序列已被美国、日本、欧洲世界三大基因、蛋白数据库收录为共享数据。并被分别授予核酸数据库编号：EF030546,蛋白数据编号：ABK32522.1。4. TRAIL的免疫荧光检测表明转染后有TRAIL蛋白的表达,表达部位在胞浆和胞膜,且24小时比48小时强,而对照细胞及转空载体细胞未见表达。RT-PCR、Westernblot示实验组TRIAL高表达,对照细胞及转空载体细胞未见表达；MTT示转染后对GFP-BMSCs本身的生长增殖没有明显影响。5.转有TRAIL的GFP-BMSCs明显抑制C6细胞存活,抑制率为62.7%,明显高于未转染细胞及转染空载体的细胞,并且C6细胞凋亡率高于未转染细胞及转染空载体细胞。结论1.神经干细胞与骨髓基质细胞均对胶质瘤细胞有靶向作用,能够“追踪”渗透到周围正常组织的肿瘤细胞,可以作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤。2.通过SD大鼠脾脏及肝脏均能够提取TRAIL基因,成年大鼠脾脏基因表达量高。3.利用脂质体转染法能够将真核穿梭质粒PDC315-TRAIL成功导入体外培养的BMSCs,构建的BMSC-TRAIL载体能够稳定表达目的基因,并对干细胞本身活性没有影响。4. TRAIL基因可以诱导C6胶质瘤细胞的凋亡。5.骨髓基质细胞替代神经干细胞作为生物载体,能够简化操作程序,有效地转染TRAIL基因抑制肿瘤的生长,促进其凋亡,并具有明显的旁观者效应。