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MYB基因是植物最重要的转录因子家族之一,广泛参与植物对非生物胁迫的应答、植物形态建成、次生代谢调节等过程。本文根据本实验室测序分析的陆地棉MaxxaBAC文库,利用RT-PCR技术由海岛棉中克隆出一个新的MYB转录因子基因GbMYB5(Genbank 登录号为:JF820389),以期为MYB基因子在植物抗非生物胁迫方面的研究提供理论基础。研究进展如下:
1、RT-PCR检测了GbMYB5在棉花不同器官组织中的表达情况。结果表明,GbMYB5基因在植物的茎、叶、蕾、絮和种子中均有表达,尤以在叶子中的表达水平最高。
2、RT-PCR对GbMYB5基因在不同胁迫处理下的表达情况进行分析。胁迫实验结果显示,重金属胁迫可短暂抑制GbMYB5基因表达,但表达量在处理48h后回升至正常水平。PEG、ABA和GA 诱导均可增强GbMYB5基因的表达。
3、构建了植物表达载体pCAMBIA2301-GbMYB5,其中含有CaMV35s启动子,具有卡那霉素抗性筛选标记。经过PCR检测及双酶切鉴定,构建的载体符合预期设计。
4、通过热激法将pCAMBIA2301-GbMYB5质粒载体转化农杆菌LBA4404,PCR检测结果表明含有目的基因的质粒载体成功导入到了农杆菌中。用含pCAMBIA2301-Gb的根癌农杆菌侵染烟草,在筛选培养基上培养,PCR鉴定14株为阳性。
5、将抗性苗移栽至温室培养,提取烟草总RNA,进行RT-PCR检测,结果表明目的基因已在烟草转录水平表达,RT-PCR鉴定9株在转录水平表达。
6、为明确GbMYB5基因的启动子功能,构建了含GUS报告基因植物表达载体PBI101-T,并转化拟南芥。对拟南芥抗性株系进行GUS组织化学染色。结果表明,在GbMYB5基因的启动子驱动下,GUS报告基因主要在转基因拟南芥的根部,以及幼苗期的叶片中表达。