春兰(Cymbidium forrestii)是集观赏、药用、食用于一体的植物,具很高的观赏、经济和文化价值。保护兰花品种资源,已成为当前我国兰花科学研究的重点和热点。本研究通过对春兰组织培养技术体系及共生真菌的研究,为解决国兰组织培养增殖倍数小、组培苗驯化成活率低等问题提供理论依据。研究结果如下:(1)不同碳源、有机添加物和不同浓度的NAA对春兰根状茎诱导与增殖的影响:培养基中添加蔗糖对春兰根状茎增殖效果最好,增殖倍数可达到6.8,是添加葡萄糖、果糖和棉砂糖处理的1.31倍、1.24倍、1.79倍;培养基中添加5%的椰子汁、香蕉汁、苹果汁的春兰根状茎的增殖倍数分别为6.7、5.3、4.8,可见椰子汁对春兰根状茎诱导和生长的促进作用明显优于香蕉汁和苹果汁;而且添加10%椰子汁比添加5%椰子汁在春兰根状茎侧枝长度、鲜重及干重方面有优势;培养基中添加植物生长调节物质以0.1mg/LBA+3～5mg/LNAA组合较有利于根状茎增殖,较高浓度和低浓度的NAA对根状茎增殖有一定的抑制作用。(2)植物生长调节物质对春兰根状茎诱导芽分化的影响:BA和NAA在春兰植株体内共同参与生理生化作用,培养基中添加3.0mg/LBA和0.5mg/LNAA是较适宜春兰根状茎诱导芽分化的,芽诱导率可达94%。(3)不同BA和IBA浓度及活性炭浓度对春兰生根壮苗的影响:0.1mg/LBA +0.5mg/LIBA浓度组合较其它组合处理有优势,平均株高可达到4.05cm,平均发根数约为4条,发根率可达87.9%。添加适当的活性炭有利于春兰的生长发育,特别是对根部的生长,以浓度为2g/L的效果最好。(4)不同温度、湿度、光照强度及兰花生物肥‘Oh-Chid’处理对春兰组培苗驯化生长的影响:兰花的生长适宜温度为20℃左右,20℃下20株春兰的组培苗的成活率为95%,而在温度25℃下春兰的组培苗的成活率仅为60%;一般兰花生长期相对湿度大于70%便可,但在驯化初期湿度80%略有利于组培苗保持坚挺不萎焉;当光照强度为40μmol·m?2·s?1时,驯化苗的个体明显偏瘦弱,生长缓慢,20株中死亡2株,而在光照强度80μmol·m?2·s?1条件下植株全部成活,而且生长明显健壮,新叶生长较多;菌根真菌为兰科植物提供生长所必需的营养物质,在混有兰花生物肥‘Oh-Chid’的基质中苗的新根数量、根的长度比对照组多1.57倍、长1.79倍,且驯化苗生长快而健壮,植株死亡率低。(5)兰花菌根真菌分离、纯化及鉴定:根据菌株形态观察分析和DNA序列测定匹配,四种兰花里提取出来的菌共17个,14个菌株分别属于被孢霉属(10株)、毛霉属(3株)、木霉属(1株),将14个菌株分别接入铁皮石斛组培瓶苗中,发现FC8、FC11对铁皮石斛组培苗生长量有明显促进作用。