前言 子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7％，占女性生殖道恶性肿瘤的20％～30％。近年来其发病率在世界范围内呈持续上升趋势，是威胁妇女生命的一个主要疾病。因此，子宫内膜癌的病因学研究及寻找早期诊断和有效治疗子宫内膜癌的方法一直是学者们研究的热点。随着分子生物学技术的飞速发展，癌基因、抑癌基因及相关物质异常被认为是正常组织癌变并导致生物学行为一系列改变的基本原因。流行病学的研究表明，服用非甾体类抗炎药可使结肠癌的发生率降低40％～50％。其原因很可能与该药对环氧合酶(COX)的抑制作用有关。COX是一种膜结合蛋白，是前列腺素生物合成的限速酶。目前发现人类基因至少含有COX的两种基因编码，即COX-1和COX-2。COX-2是早表达基因，它被细胞因子、生长因子、丝裂原等迅速诱导产生，在炎症和肿瘤中起重要作用。越来越多的研究表明，在结直肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、膀胱癌等多种上皮性肿瘤中，都有COX-2表达的异常增高，但有关COX-2在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌临床病理特征关系的研究尚未见报道。为确定COX-2与子宫内膜癌发生、发展的关系，本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对32例子宫内膜癌，10例不典型增生子宫内膜和10例正常子宫内膜组织中COX-2 mRNA水平进行检测。 资料与方法 1．资料来源 取2000年3月～2002年3月于中国医科大学第一、第二临床学院妇科刮宫或手术切除的新鲜组织标本52例，分为3组：门）子宫内膜癌组32例；p）不典型增生子宫内膜组10例；闷）正常子宫内膜组 10例。所有病例均为初治病例，平均年龄 53．7岁。部分标本经福尔马林固定，进行常规HE染色，请二位病理专家阅片，按国际妇产联盟（FIGOV 年修订的标准确定病理学诊断、组织学类型和组织学分级。其余标本置液氮中冷冻，然后送于－70℃冰箱中保存。子宫内膜癌组均有完整的！临床病理资料，其中内膜样腺癌22例，腺角化癌7例，透明细胞癌3例；手术－病理分期 1期 18例，11期 9例，皿期5例；组织学分级 G；级 14例人。级10例下。级8例；伴深肌层浸润12例；伴淋巴结转移5例；腹腔液细胞学检查阳性4例。 2．主要试剂 COX－2及内参照引物均由北京奥科生物有限责任公司合成；提取总RNA的TRIzol试剂由美国Promega公司提供；逆转录和PCR扩增所需的酶及其它试剂由日本TaKaRa公司提供；电泳用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。 3．方法 门人总RNA提取：采用TRIZOI一步抽提法。RNA纯度采用紫夕透射仪测定OD值刀D260／280值为1．6－2．0。 ＊）逆转录合成 CDNA：在 10pl反应体系中分别加人样本RNA l…以 90℃孵育3而n，42℃ 30而n合成 cDNA。 闷）PCR扩增和产物分析：在PCR反应体系中将CDNA产物及引物在95℃905 预变性，94℃905 变性，55℃455 退火，72℃905复性，进行35个循环后，72℃10min延伸。另一反应体系中同时扩增p－achn作为内对照。将PCR扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，溪乙锭染色分析，紫外灯下拍照，电泳凝胶成像及自动分析系统摄像、并检测各扩增带的产物含量。thX174－Hinc 11 DNAMarker为分子量标准。每次实验均设阳性及空白对照。 ·2· 4．结果判断上B显色后，与 Marker相比较有 305hp条带及内对照690hP条带显示者判断为阳性，仅有内对照690hP条带显示者判断为阴性。用内对照吸光度值标化COX－2吸光度值，得到COX－2的相对含量，具体计算公式如下：COX－2相对含量＝（COX－2密度／p－actin密度）x 100。 5．统计学处理：采用SPSS软件进行统计学处理。表达率采用 Fisher’s精确概率法和 x‘检验；相对含量采用方差分析和 t检验。 另 果 1．COX－ZmRNA在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜及正常子宫内膜组织中的表达：三种组织中都有COX—2 mRNA的表达，在子宫内膜癌和不典型增生子宫内膜组织中，COX－2 mRNA表达率高于正常子宫内膜组织，经Fisher’s精确概率法检验，有显著性差异（P＜0．05入而两者间表达率比较，差异无显著性h＞0．05入 COX－2 mRNA在三种组织中的相对含量经方差分析，差异非常显著什＜0．01入两两比较经Q检验，亦有显著性差异汗＜O．01）。 2．COX－ZmRNA异常表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系：COX－ZmRNA的表达率在不同的病理类型、手术－病理分期＼组织学分级、肌层浸润、腹腔液细胞学检查及淋巴结转移的子宫内膜癌组织中比较均无显著性差异；COX－ZmRNA的相对含量在深肌层浸润及中、低分化子宫内膜癌组织中，明显高于浅肌层浸润及高分化子宫内膜癌组织，有非常显著性差异瞩＜o．01L而在其他不同临床病理特征的子宫内膜癌组织中，其相对含量比较均无显著性差异。 ·3· 讨 论 1．COX－2基因的结构、功能及致