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背景近年来,腹泻型肠易激综合征的发病率和患病率不断上升,已经成为一种全球普遍存在的消化系统疾病。但是,本病的病因及发病机理仍尚未阐明。在治疗方面,西医仍缺乏有效的治疗措施,主要针对症状进行治疗。中医药治疗腹泻型肠易激综合征,能够“无失天信,无逆气宜”,尤其是辨证论治的手段,在控制疾病病情、预防IBS-D复发等方面,优势显著。痛泻安肠方是导师李军祥教授通过多年临床实践总结的临床经验方,能显著改善IBS-D患者腹部疼痛、大便稀溏及腹部胀满等症状,在腹泻型IBS的治疗中效果良好,但是,其具体作用机理尚不十分清楚。目的本实验以腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠为研究对象,明确痛泻安肠方对IBS-D大鼠的疗效,并以PLC-y/TRPV1通路为出发点,明确痛泻安肠方是否通过调控PLC-γ/TRPV1通路而达到治疗腹泻型肠易激综合征的目的,进而阐明痛泻安肠方治疗腹泻型肠易激综合征的作用靶点,为痛泻安肠方治疗腹泻型肠易激综合征的进一步临床应用提供实验依据。方法实验一:采用冰醋酸灌肠、结直肠扩张刺激、夹尾刺激结合番泻叶灌胃多因素联合刺激法制备腹泻型肠易激综合征大鼠模型,于造模结束后,观察大鼠的一般情况,评价其粪便性状,检测其腹壁撤退反射(AWR)评分。治疗结束后,再次观察上述指标。实验二:采用冰醋酸灌肠、结直肠扩张刺激、夹尾刺激结合番泻叶灌胃多因素联合刺激法制备腹泻型肠易激综合征大鼠模型,经过2周干预后,应用Real time-PCR和Western-blot分别检测PLC-γ、TRPV1的基因和蛋白表达,采用Elisa测定血清P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达。结果实验一:1实验模型制备第3天开始,除正常组外,随着时间的变化,大鼠精神状态由灵敏变得呆滞,食欲较差,毛发凌乱并逐渐失去光泽。至第4周,精神状态极差,毛发干枯脱落,甚至完全失去光泽,体重减轻,活动度极差。而给予痛泻安肠方干预后,各治疗组大鼠较模型组精神逐渐好转,体重开始增加,食欲恢复,毛色开始变得有光泽,活动度良好。2造模开始后,大鼠粪便性状开始变软,逐渐变得稀烂;造模4周时,各组大鼠粪便Bristol分级评分较正常组升高(P<0.01),粪便含水量明显增加(P<0.01);经过痛泻安肠方干预后,大鼠粪便Bristol分级评分下降(P<0.01)。3造模完成后,大鼠AWR评分较正常组升高(P<0.05,P<0.01),经过痛泻安肠方干预后,痛泻安肠方各剂量组大鼠AWR评分下降(P<0.05,P<0.01)。实验二:1 Real time-PCR 结果显示,IBS-D 大鼠结肠组织中 PLC-y mRNA、TRPV1 mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01),痛泻安肠方各剂量组和得舒特组大鼠PLC-γ mRNA、TRPV1 mRNA表达下降(P<0.05,P<0.01);Western-blot结果显示,模型组大鼠结肠组织TRPV1蛋白表达升高(P<0.05),痛泻安肠方干预后,大鼠结肠TRPV1蛋白表达降低(P<0.01;P<0.05)。2模型组大鼠血清中SP和CGRP含量均明显升高(P<0.01),经过痛泻安肠方干预后,大鼠血清SP和CGRP含量均显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论1模型制备后,大鼠肠道高敏感性、粪便Bristol分级评分和粪便含水量均升高,其腹痛、腹泻症状符合IBS-D临床特征。提示冰醋酸灌肠、结直肠扩张刺激、夹尾刺激结合番泻叶灌胃可成功复制IBS模型。2痛泻安肠方能降低IBS-D模型大鼠AWR评分、粪便Bristol分级评分和粪便含水量,说明痛泻安肠方可降低IBS-D大鼠内脏高敏感性,改善大鼠腹泻症状。3痛泻安肠方可降低结肠组织PLC-γmRNA、TRPV1mRNA和PLC-γ、TRPV1蛋白的表达,降低大鼠血清SP、CGRP的水平,提示痛泻安肠方通过下调PLC-y/TRPV1信号通路的功能,抑制IBS-D大鼠内脏高敏。