【摘 要】
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共价连接的抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达 前言 大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,目前其发病率在我国居第三位,死亡率呈逐年上升趋势,因此探讨有效的诊断和治疗手段是
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共价连接的抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达 前言 大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,目前其发病率在我国居第三位,死亡率呈逐年上升趋势,因此探讨有效的诊断和治疗手段是大肠癌研究的重要课题。利用单克隆抗体作为载体的大肠癌导向诊断和治疗已经取得了一定进展,但是完整抗体由于分子量较大,组织穿透能力差,含有的Fc段易造成体内非特异性分布,并且绝大多数为鼠源性,对人体有较强的免疫原性,因而在显像诊断及治疗应用中一直未能取得满意的效果。利用基因工程技术改造而获得的小分子抗体,如Fab和scFv(single-chain Fv)等,分子量小(Mr25～30kDa),穿透力强,具有快速的血浆清除率;不含Fc段,免疫原性低,可明显提高对肿瘤组织的特异性。但由于只有一个抗原结合位点,其亲和活性大大降低;分子量过小,在体内及靶组织滞留的时间短,易在肾脏清除,使绝大部分抗体还未在肿瘤组织充分发挥作用就已从体内清除,因而极大限制了其在肿瘤诊断及治疗中的应用。近年来,人们用scFv为元件构建出来的基因工程双价抗体分子因具有类似于完整抗体IgG的双价结合位点,与scFv相比其抗体的亲和性大大提高,适中的分子量(Mr 55～80kDa)既保证了抗体在肿瘤组织的良好穿透能力,又大大改善了scFv在体内清除过快的缺点,在肿瘤的显像和治疗方面显示出良好的应用前景。 ND-1是本室宋今丹于1983年以人大肠癌细胞系CCL-187为免疫原制备的鼠抗人大肠癌单克隆抗体,已进行的近千例临床病理检测显示,该单抗对高中分化大肠癌组织具有特异结合活性,并优于目前广泛采用的美国商业产品抗CEA单抗。利用ND-1的可变区基因构建的ND-1scFv已经在大肠杆菌中获得功能性表达,研究证实ND-1scFv具有与亲本单抗ND-1相同的结合活性,在荷瘤裸鼠的体内实验中,亦显示出快速的显像能力和清除速度。然而,和其他scFv类似,ND-1scFv由于分子量小,只有
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