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目的:本研究主要分两部分。第一部分是黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究,主要观察黄芪多糖诱导DC成熟及对DC免疫功能的影响;第二部分是黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗对荷瘤小鼠免疫治疗效应的研究,主要观察黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤效果,并探讨黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗体内抗瘤的机制,为进一步开拓中药治疗肿瘤的途径提供实验和理论依据。方法:1.人外周血单个核细胞用IL-4、GM-CSF诱导分化为未成熟DC,加入黄芪多糖促进成熟,并设细胞因子组、黄芪多糖+细胞因子组,显微镜下连续观察形态变化,用FACS检测各组DC表型。2.成熟DC以肿瘤抗原致敏,与同种异体T细胞共培养,用MTT法检测T淋巴细胞增殖功能,用ELISA法检测共培养上清IL-12、IFN-γ水平。3.经DC激活的CTL细胞与肿瘤细胞共培养,用LDH释放法检测CTL对靶细胞特异性杀伤能力。4.小鼠骨髓来源的DC以黄芪多糖诱导成熟,负载S180肿瘤抗原,制备肿瘤疫苗。建立S180荷瘤小鼠模型,随机分成模型对照组、阳性对照组、黄芪多糖组和细胞因子组。给S180荷瘤小鼠进行免疫治疗,观察抑瘤率和小鼠生存时间。5.小鼠经眼眶采血,分离血清。ELISA法检测小鼠血清IL-12、TNF-α的水平。6.取小鼠脾脏,分离淋巴细胞,用MTT法检测小鼠脾脏淋巴细胞转化率,FACS检测小鼠Th1/Th2亚群。结果:1.黄芪多糖诱导的DC经形态学观察和表型鉴定,符合成熟DC的特征,黄芪多糖可以诱导DC成熟。2.黄芪多糖诱导的DC激活的CTL体外特异性杀伤肿瘤细胞的能力与TNF-α诱导的DC无显著性差异,提示黄芪多糖诱导的DC可以有效的激活CTL细胞,发挥特异性抗肿瘤作用。3.黄芪多糖诱导的DC能刺激同种异体T淋巴细胞增殖,并提高DC与T细胞共培养上清IL-12、IFN-γ的水平,提示黄芪多糖诱导的DC可以有效的给T细胞提呈抗原,提供活化信号,促进T细胞增殖,并分泌IFN-γ;同时,有效的抗原提呈也促使DC活化,分泌抗肿瘤细胞因子IL-12。4.黄芪多糖诱导的DC疫苗可减缓肿瘤生长速度,显著发挥体内抑瘤作用,延长荷瘤小鼠的生存时间。5.黄芪多糖诱导的DC疫苗能促进S180荷瘤小鼠分泌TNF-α、IL-12,通过抗肿瘤细胞因子途径发挥抗肿瘤作用。6.黄芪多糖诱导的DC疫苗可以显著提高小鼠脾脏淋巴细胞转化率,促使Th1/Th2向Th1转化,提示黄芪多糖诱导的DC疫苗可以增强机体免疫功能,通过调节Th1/Th2失衡状态向Th1方向转化,增强机体的细胞免疫功能。结论:黄芪多糖可以体外诱导DC成熟。经黄芪多糖诱导成熟的DC疫苗可有效的向T细胞提呈抗原,促进T细胞的增殖和活化,增加抗肿瘤细胞因子的分泌,激活CTL特异性抗肿瘤的能力,显示了良好的体外抗肿瘤效果。黄芪多糖诱导的DC疫苗可以通过增加荷瘤小鼠T细胞增殖能力、促进细胞因子TNF-α、IL-12的产生、诱导Th1/Th2向Th1转化等机制增强机体抗肿瘤免疫功能,减缓荷瘤小鼠瘤体生长速度,发挥延长生命作用。