MAP30(Momoridica anti-HIV protein of 3 0KD)是从苦瓜中分离得到的一种分子量为30KD的单链I型核糖体失活蛋白。研究表明MAP30具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌等多种生物学活性,其中抗肿瘤活性尤为引人关注,但MAP30作为大分子药物进入细胞的效率有限,如何提高MAP30进入细胞的效率是解决其在抗肿瘤应用方面的关键。细胞穿膜肽(cell-penetratingpeptides,CPPs)是一类具有高效转运能力的多肽链,已被证实能将多种生物活性物质(核酸、蛋白、脂质体等)有效地携带入细胞内。本课题组早先发现一种来源于人类超氧化物歧化酶C端的肽链(命名为HBD)具有高效的穿膜能力,本课题将通过HBD将MAP30跨膜运输到细胞内以提高其对肿瘤细胞的穿膜效率和细胞毒性。本课题通过基因克隆构建了一系列HBD与MAP30融合的表达载体以进行MAP30-HBD重组蛋白的表达和纯化工艺的优化,实验结果表明通过去除MAP30的信号肽,获得了可溶形式表达的重组蛋白;通过His标签后置于C端,Ni-NTA纯化可以成功获得高纯度重组MAP30蛋白(rMAP30)和重组MAP30-HBD蛋白(rMAP30-HBD);超螺旋质粒切割实验和兔网红细胞裂解系统实验证实了融合了 His标签或HBD的重组蛋白仍然保持了天然MAP30具有的核糖体失活蛋白活性;共聚焦显微镜观察到异硫氰酸荧光素(FITC)标记的rMAP 30-HBD融合蛋白穿膜效率明显高于没有融合HBD的rMAP30,表明HBD显著提高了 MAP30的细胞穿膜能力;体外的MTT细胞毒性试验和Annexin V-FITC流式凋亡实验以及体内小鼠肿瘤模型实验均证实了 HBD融合策略的有效性和提高MAP30的抗肿瘤活性。本课题首次将CPP与MAP30进行融合表达,并发现CPP确实能够有效地提高MAP30的穿膜能力和细胞毒性,这预示了与细胞穿膜肽结合的MAP30在肿瘤治疗领域中将更具有潜力,拓展了 MAP30在抗肿瘤研究中的应用价值。