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目的:旨在通过Ⅰ期临床试验,并建立快速、灵敏、准确的测定人血浆中恩替卡韦的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,研究江苏吴中医药集团有限公司苏州制药厂研发的恩替卡韦分散片与中美上海施贵宝制药有限公司生产的恩替卡韦片的相对生物利用度,评价两者的生物等效性,为新药报批及临床安全、合理用药提供试验依据。方法:本试验采用开放、随机、双周期自身交叉试验设计,入组中国健康男性志愿者24名,随机分为二组,每组12名。单剂量口服给药,每组受试者分别于试验当日早晨空腹一次口服恩替卡韦分散片或参比制剂1.0mg,分别于给药前(0h)、给药后10min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h各采集上肢静脉血约5m L置于肝素处理的试管中,静置约30min后2000r·min-1离心10min,分离血浆,双份样本置-30℃冰箱保存。药物清洗期为28天,即第1天第一次给药,第29天第二次给药。采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法,以罗布卡韦作为内标,测定恩替卡韦血药浓度。恩替卡韦血药浓度-时间数据经Win Nonlin 6.1处理得受试制剂和参比制剂的药代动力学参数,根据受试制剂和参比制剂的AUC0-tn和AUC0-￥,求得受试制剂的相对生物利用度,并求出其均值及标准差。对受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-tn和AUC0-￥经对数转换后进行方差分析、双单侧t检验,并计算90%置信区间,对Tmax进行非参数检验,评价恩替卡韦分散片试验制剂与参比制剂的生物等效性。结果:本研究共入选24例中国男性健康受试者,全部完成了临床试验。受试者在研究者的监督下服药,并完成了方案要求的所有抽血项目、生命体征检查及实验室检查,依从性良好。本试验建立的血浆中恩替卡韦的HPLC-MS/MS测定方法,血浆中杂质不干扰样品的测定,无明显基质效应影响;血浆样品中恩替卡韦的萃取回收率在67.97%~70.89%之间。标准曲线线性范围为0.05μg·L-1-20μg·L-1,线性关系良好;低、中、高三个浓度的批内和批间精密度均小于15.0%;贮备液于5℃条件下放置20天稳定;血样处理后的检测样品在进样器中放置24h稳定,血样室温放置4h稳定,血样-20℃反复冻融三次稳定,血样-20℃冻存三个月稳定。方法学检测符合生物样品分析要求。本次试验过程中未出现严重的不良反应,试验结束后血生化、血常规和尿常规检查个别指标异常,均为轻度,未采取任何措施自行恢复。24名受试者入选本次试验,全部受试者的血药浓度-时间数据参与药代动力学和生物等效性分析。恩替卡韦血药浓度在0.05-20μg·L-1范围内线性关系良好(r=0.9998),最低定量浓度为0.05μg·L-1,日内及日间RSD<15%。恩替卡韦分散片试验制剂和参比制剂恩替卡韦主要药代动力学参数t1/2分别为62.35±30.26h和60.48±26.54h,Tmax分别为0.63±0.21h和0.62±0.40h,Cmax分别为10.51±3.11μg·L-1和10.25±2.98μg·L-1,AUC0-tn平均值分别为28.91±6.63μg·h·L-1和28.58±5.73μg·h·L-1,AUC0-￥平均值分别为35.22±9.50μg·h·L-1和34.61±7.90μg·h·L-1,受试制剂恩替卡韦分散片的相对生物利用度F0-tn和F0-￥分别为101.25±12.02%和102.99±20.40%。生物等效性计算采用Win Nonlin 6.1计算,受试制剂和参比制剂的AUC0-tn、AUC0-￥及Cmax经对数转换后进行方差分析,结果表明制剂间、给药顺序间和周期间均无显著性差异;AUC0-tn的90%的置信区间为95.98%-105.22%,AUC0-￥的90%的置信区间为94.13%-108.39%,Cmax的90%的置信区间为90.49%-116.85%,均在80%-125%范围内,所以判定恩替卡韦受试制剂与参比制剂具有生物等效性,二者为生物等效制剂。结论:1.建立的HPLC-MS/MS测定方法专属、准确、灵敏,可用于恩替卡韦分散片口服给药人血浆中恩替卡韦的检测。2.试验制剂恩替卡韦相对生物利用度F为102.99±20.40%。3.多因素方差分析显示,恩替卡韦分散片试验制剂和参比制剂口服双交叉试验恩替卡韦主要药代动力学参数AUC,Cmax和Tmax药物时间及周期间无显著差异,但个体间存在统计学差异。进一步双单侧t检验符合生物等效性的统计学要求,符合生物等效性的假设,即江苏吴中医药集团有限公司苏州制药厂研发的恩替卡韦分散片与中美上海施贵宝制药有限公司生产的恩替卡韦片具有生物等效性,为生物等效制剂。