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岩藻聚糖硫酸酯是一种普遍存在于褐藻细胞壁基质和棘皮动物体中的水溶性硫酸杂多糖。它具有多种生物活性,例如抗肿瘤、抗凝血等等。最近研究表明岩藻聚糖硫酸酯可以诱导人淋巴癌细胞、人结肠癌细胞、人乳腺癌细胞等的凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。有文献报道岩藻聚糖硫酸酯可以诱导人结肠癌细胞HT-29发生凋亡,本实验在观察岩藻聚糖硫酸酯诱导HT-29细胞凋亡时发现存在自噬现象。因此本实验研究了岩藻聚糖硫酸酯诱导HT-29凋亡和自噬的关系。论文的主要内容就结果如下：1.岩藻聚糖硫酸酯诱导HT-29凋亡MTT结果显示岩藻聚糖硫酸酯可以显著地抑制HT-29的存活。倒置显微镜下观察发现,岩藻聚糖硫酸酯作用后,HT-29增殖缓慢,细胞皱缩、体积缩小、细胞间隙增大,细胞内空泡增多。通过测定培养基中LDH的含量检测细胞膜的完整性,结果表明的释放量并没有明显增加,只有高浓度岩藻聚糖硫酸酯作用48h后,LDH的释放量明显增加。Hoechst33342染色荧光显微镜下观察结果显不,400μg/mL岩藻聚糖硫酸酯作用48h后,HT-29细胞部分呈致密浓染或呈碎块状致密浓染。流式细胞仪检测线粒体膜电位,结果表明岩藻聚糖硫酸酯作用24h时,线粒体膜电位明显降低。本实验利用分光光度法检测细胞内caspase-3、 caspase-8及caspase-9的活性,结果显示岩藻聚糖硫酸酯作用于HT-29细胞后,caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性明显升高。Annexin V-FITC/PI双染的流式检测,岩藻聚糖硫酸酯作用于HT-29后凋亡率明显增高。Western blot结果表明岩藻聚糖硫酸酯作用于HT-29细胞后,Bcl-2的表达量减少而Bax的表达量增多。一系列的实验结果表明,岩藻聚糖硫酸酯可诱导人结肠癌细胞HT-29发生凋亡,膜受体途径和线粒体途径在此凋亡中都发挥了重要作用；岩藻聚糖硫酸酯可以下调HT-29中Bcl-2的表达量和上调Bax的表达量,从而促进细胞凋亡2.岩藻聚糖硫酸酯诱导HT-29自噬MDC染色结果表明,岩藻聚糖硫酸酯作用于HT-29后,细胞内出现许多点状荧光颗粒,用自噬抑制剂3-MA预处理后,点状荧光颗粒明显减少。Western blot结果显示,岩藻聚糖硫酸酯作用于HT-29细胞后,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化明显升高,LC3-Ⅱ的表达量明显升高：用自噬抑制剂3-MA预处理后,LC3-Ⅰ向LC-Ⅱ转化明显降低,LC3-Ⅱ的表达量明显降低。由此可以推断岩藻聚糖硫酸酯可诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬。3.岩藻聚糖硫酸酯诱导HT-29自噬和凋亡的关系3-MA抑制自噬后,MTT结果显示岩藻聚糖硫酸酯对HT-29细胞的抑制活性明显增强,线粒体膜电位的下降程度明显增强,caspase-3、caspase-8、caspase-9活性明显升高,凋亡率明显升高。一系列的实验结果表明,自噬在岩藻聚糖硫酸酯诱导的HT-29细胞凋亡的过程中起保护细胞的作用。凋亡抑制剂Z-VAD-FMK抑制caspase依赖的凋亡后,MTT结果表明,抑制caspase诱导的凋亡后,自噬程度增强,引起了自噬性程序式细胞死亡。本实验研究结果表明自噬在岩藻聚糖硫酸酯诱导的HT-29细胞凋亡的过程中起保护细胞的作用,因此可以将自噬抑制剂与凋亡诱导剂结合来抑制肿瘤细胞。