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低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株经0.1%的甲醛灭活后以差速离心法提纯的全病毒作为抗原,与等量弗氏完全佐剂充分混合制成免疫原,腹腔注射免疫8周龄BALB/c小鼠,200 μg/只;2周后,抗原再与等量弗氏不完全佐剂充分混合制成免疫原,腹腔注射;4周后,尾静脉注射相同剂量不加佐剂的抗原,3天后,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。以间接ELISA和HI试验进行筛选,筛选出阳性克隆,并经有限稀释法三次亚克隆之后,共获得三株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C2C5、D3B10、C2H8。对单抗的特异性鉴定结果表明,腹水单抗的间接ELISA效价分别为5×214、210、5×212,但无HI效价。三株单抗的免疫球蛋白亚类均为IgG2a。在Dot-ELISA试验中三株单抗中的两株与13个AIV H9N2国内分离株、4个AIV H5N1国内分离株都反应,而与11个NDV国内分离株,IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。一株与13个AIV H9N2国内分离株反应,与4个AIV H5N1分离株、NDV、IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。这些结果表明其中两株单抗C2H8和D3B10可能是针对禽流感共同抗原的单抗。而C2C5则可能是针对H9 AIV特异性的单抗。 我们采用SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明单抗C2H8和D3B10与AIV H9N2和AIV H5N1均有的60Kd的蛋白条带反应,而不与其他条带反应,表明这两株单抗特异的针对AIV H9和AIV H5的共同抗原成分60Kd NP蛋白。而C2C5不与扬州大学硕士学位论文电泳蛋白条带反应,说明不是针对线性表位的,而可能是针对空间表位的单抗,其具体表位还需进一步鉴定。这两株针对NP蛋白的单抗在禽流感病毒毒株的抗原分析、禽流感血清学诊断和流行病学调查等方面存在着潜在的应用价值。