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本研究从河北、北京、天津等发病鸡群中分离到8株新城疫病毒,其代号分别为TJ/99、SJZ/99、YQ/01、TS/01、ZD-1/02、ZD-2/02、ZD-3/03、BT/03,经鸡胚终点稀释法克隆纯化后,对其进行了形态学观察和毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定。电镜观察可见8株分离株呈圆形、线形和不规则形,病毒粒子表面有纤突样结构,各毒株大小不同,粒子直径或长轴在100~500nm之间。毒力指数测定结果显示,8株NDV的MDT在42.9~49.5h之间,ICPI在1.93-2.00之间,IVPI在2.68~2.89之间,表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株。 对上述8株分离株以及La Sota、F48E8、SF、BJ、QH8/79、SH7/99等共14株NDV的F蛋白裂解位点附近的基因进行了克隆和同源性分析。结果发现:(1)疫苗用毒La Sota株同其它13种强毒株之间的同源性在85.0%~89.8%之间,普遍较低;国内标准强毒F48E8株与La Sota株及国内分离毒株的同源性在90%左右(89.1%~90.4%);国内分离株之间的同源性在88.2%~99.4%之间,不同毒株之间的同源性有高有低。(2)F48E8株F蛋白的裂解位点为112RRQRRF117,而其它12株强毒株F蛋白的裂解位点为112RRQKRF117,符合强毒株裂解位点的特征,同毒力测定结果相一致。 应用DNAStar软件对上述克隆测序的14株NDV及从Genebank上下载的国内外有代表性的33株NDV等共47株NDV的F基因233bp(157~389bp)长度的核苷酸片段及其相应的氨基酸序列(53~130位氨基酸残基)进行了比较,建立了系统发育树,并确定了8个分离株及SF、BJ株的基因型。结果表明:(1)所有NDV分离毒株的F基因都没有碱基的缺失和插入,但有多处点突变,分散存在。(2)分离株的55~61、72、84~89及128~130之间的氨基酸均高度保守,突变的氨基酸位点多集中在101~111之间。(3)ZD-1/02、ZD-2/02、ZD-3/02、BJ、YQ/01、TJ/99同鹅源的NDV株JS01-5-GO、ZJ00-1-GO及JS98-3-GO株在系统发育树上的距离较近,说明当今鸡ND的流行同鹅的ND有着密切的关系。(4)BJ、SF、TJ/99、YQ/01、TS/01、ZD-1/02、ZD-2/02、ZD-3/03等8株为基因Ⅶ型,SJZ/99和BT/03为基因Ⅵ型,表明河北、北京、天津等地区ND的流行以新的基因Ⅶ型的为主,但同时又有旧基因Ⅵ型的存在,说明ND的流行情况比较复杂,给ND的防制工作带来了一定的难度。 在以上生物学试验及遗传变异分析的基础上,本研究对分离鉴定的8株NDV及La Sofa、F48E8、QH8/79、SH7/99等共12株NDV,采用固定病毒,稀释血清的方法,进行交叉血凝抑制试验和鸡胚交叉中和试验。结果表明,La Sota同强毒株之间的相关系数较低,在5.89%~48.41%之间。强毒株之间相关系数除去个别的几个相对较低外,大部份都在25.12%~186.19%之间。 将交叉中和试验和遗传变异分析的结果相结合,进行综合分析,结果说明疫苗毒La Sota株同现今流行毒株之间确实存在一定的抗原性差异性。另外可以看出同一基因型之间的相关系数较高,如属于基因Ⅵ型的SJZ/99和BT/03的相关性为114%,属于基因Vn型的毒株之间的相关系数在25.12%186.19%之间,从一定程度上表明基因型同抗原性存在着一定的相关性,但没有明显的规律。若要彻底弄清基因型同抗原性的相关关系,就必须进一步做交叉保护试验来验证。