荧光定量PCR检测WT1 mRNA在白血病的表达与意义

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oyfj2009
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目的 建立WT1 mRNA荧光定量PCR方法,应用该PCR方法检测急性白血病和慢性粒细胞白血病患者WT1 mRNA转录水平,探讨WT1基因与急性白血病和慢性粒细胞白血病病程的关系。对部分化疗,异基因骨髓移植后残留白血病(MRD)病例进行WT1 mRNA动态监测,探讨能否作为检测残留白血病可靠方法,为急性白血病和慢性粒细胞白血病临床治疗提供有价值的信息。 方法 建立荧光定量PCR进行特异性、敏感性和重复性试验,用重组质粒绘制WT1标准曲线。应用建立的PCR方法对47例急性白血病(AL)、39例慢性粒细胞白血病(CML)和10例正常健康人的外周血或骨髓标本进行WT1基因的检测。 结果 1、荧光定量PCR循环阈值(CT)与该模板的起始拷贝数(N0)的对数存在线性关系,Y=-3.831X+43.54,r=-1.00。高和低值(7.0×106Copies/μ1和2.0×103Copies/μ1)的绝对值批内和批间CV值分别为8.96%、13.2%和9.54%、18.4%,CT值的CV值分别为0.58%、1.03%和0.64%、1.13%。灵敏度为1:104。 2、检测45例初发急性白血病(AL)中35例WT1 mRNA阳性(阳性率77.8%),其中27例初发急性粒细胞白血病(AML)中有24例阳性(88.9%),18例初发急性淋巴细胞白血病(ALL)中有11例阳性(61.1%)。2例缓解急性白血病均为阴性。39例慢性粒细胞白血病(CML)中慢性期21例有8例阳性(38.1%),加速期和急变期17例均为阳性(100%),1例异基因骨髓移植后WT1 mRNA持续为阴性。 结论 1、我们所建立的WT1基因的荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,是一种在监测缺乏特异性克隆标志白血病的MRD中有希望的工具。、实验结果显示脚了基因在急性自血病表达率达77.8%。、‘漫性粒细胞白血病脚7的表达与病程进展相平行,在慢性期砂77表达低,急变期表达水平增高。高表达可预示急变。
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